Eine der jüngsten Entdeckungen innerhalb des Renin-Angiotensin-Systems (RAS) stellt der Renin/Prorenin-Rezeptor (RER) dar. An diesem Rezeptor wirken Renin und Prorenin als Liganden, wobei ihre enzymatische Aktivität im Sinne einer Prozessierung von Angiotensinogen zu Angiotensin I um ein Mehrfaches ansteigt. Darüber hinaus initiieren diese Liganden eine Signaltransduktionskaskade, deren Erforschung Gegenstand dieser Arbeit war. Mittels yeast two-hybrid screening wurde der Transkriptionsfaktor promyelocytic zinc finger protein (PLZF) als direkter Interaktionspartner des RER identifiziert und mittels Koimmunpräzipitation bestätigt. Eine Homodimerisierung des RER konnte ebenfalls nachgewiesen werden. Nach Aktivierung des RER mit Renin transloziert PLZF in den Nukleus, um dort die Transkription des RER selbst zu reprimieren, bzw. die Transkription von PI3K-p85a zu aktivieren. Diese Effekte waren durch siRNA gegen den RER aufhebbar. Site-directed mutagenesis von Promotorkonstrukten sowie electrophoretic mobility shift-assay (EMSA) konnten ein PLZF-cis-Element innerhalb des RER-Promotors nachweisen. Chromatin- Immunpräzipitations-Experimente wiesen eine 6-fach gesteigerte Rekrutierung von PLZF auf diesen Promotorabschnitt unter Renin-Stimulation nach. Renin- Stimulation verursachte ebenfalls eine Zunahme der Zellzahl sowie eine Abnahme der Apoptose, wobei diese Effekte durch PI3K-Inhibition partiell und durch siRNA gegen PLZF vollständig aufgehoben werden konnten. mRNA- Expressionsuntersuchungen von RER und PI3K-p85a in Geweben von PLZF-knockout- Mäusen bestätigten die Signifikanz von PLZF als übergeordneten Regulator der Transkription dieser beiden Gene. Zusammenfassend konnte hiermit erstmalig eine Signaltransduktionskaskade des RER beschrieben und charakterisiert werden.
One of the most recent discoveries within the RAS is the renin/prorenin receptor (RER). Receptor binding of the ligands renin and prorenin increases their enzymatic activity in terms of the generation of angiotensin I and also induces an intracellular signal transduction cascade. Via yeast two-hybrid screening, the transcription factor promyelocytic zinc finger protein (PLZF) has been identified as direct interaction partner of the RER which has been confirmed by co-immunoprecipitation. A homodimerization of the RER has also been demonstrated. Upon activation of the RER with renin, PLZF translocates into the nucleus and reduces the transcription of the RER or increases the transcription of PI3K-p85a. These effects were abolished by siRNA against the RER. Site-directed mutagenesis of promoter constructs as well as electrophoretic shift-assays (EMSA) identified a PLZF cis-element within the RER promoter. Chromatin-immunoprecipitation experiments demonstrated a 6-fold increased recruitment of PLZF to this promoter area upon stimulation by renin. Renin stimulation also induced an increase in cell number and a decrease of apoptotic activity. These effects were partly abolished by PI3K inhibition and completely abolished by siRNA against PLZF. The expression analysis of RER and PI3K-p85a in tissues of PLZF-knockout mice confirmed the role of PLZF as upstream regulator of these two genes. To conclude, this work demonstrates and characterizes for the first time the existence of a signal transduction cascade that involves the RER.
