dc.contributor.author
Vandersee, Staffan Lars Mikael
dc.date.accessioned
2018-06-07T15:44:53Z
dc.date.available
2008-05-13T00:00:00.649Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/1531
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-5733
dc.description
Titelblatt und Inhaltsverzeichnis
Einleitung
Problem- und Zielstellungen
Material und Methoden
Ergebnisse
Diskussion
Zusammenfassung
Literaturverzeichnis
dc.description.abstract
Der Klonalitätsnachweis mittels Gamma-T-Zell-Rezeptor-DNA-PCR mit
anschließender Fragmentanalyse ist ein wesentliches Mittel in der Diagnostik
kutaner T-Zell-Lymphome. Insbesondere die Verbesserung des
Frühdiagnosevermögens durch Erhöhung der analytischen Sensitivität stellte den
Schwerpunkt der vorliegenden Arbeit dar. Es sollte die verlustfreie Gewinnung
der DNA aus paraffinisierten Hautproben verbessert, die Sensitivität der PCR
durch Veränderungen der Primerapplikationszeitpunkte und Farbstoffauswahl
optimiert, sowie das Potenzial dieser PCR zur Frühdiagnostik bestimmt und im
Vergleich zu präexistenten Verfahren gesteigert werden. Folgende
Modifikationen führten zu einer Sensitivitätsverbesserung der Methode im
Vergleich zu bisherigen Standardprotokollen: Verwendung des Farbstoffs TET für
die Primermarkierung bei der Gamma-1- und TET bei der Gamma-2-PCR sowie die
zusätzliche Zugabe der doppelten Standardprimermenge nach der Hälfte der
Amplifikationszyklen der PCR. Die Anwendung dieses Protokolls an Stichproben
von jeweils 15 histologisch gesicherten sowie lymphomähnlichen Dermatosen wies
ein höheres Vermögen zum Klonalitätsnachweis als vorbestehende Methoden wie
die TGGE auf. Aufgrund des höheren Auflösungsvermögens der Fragmentanalyse
konnten beim ersten Versuch eine, beim zweiten sechs Diagnoseänderungen zum
Vorbefund nachgewiesen werden. Die Applikation des Verfahrens bei einer
Stichprobe aus Probenpaaren von 15 Patienten mit einer frühen lymphomnegativen
und einer späten lymphompositiven Histologie, zeigte bei drei der frühen
Proben Klonalität bevor die Histologie lymphomverdächtig erschien.
Zusammenfassend konnte somit ein PCR-Protokoll mit einer verbesserten
Sensitivität und Frühdiagnosepotenz im Vergleich zu den bisherigen Verfahren
vorgestellt werden.
de
dc.description.abstract
Clonality-detection by using gamma-T-cell-receptor-DNA-based PCR with
consecutive fragment analysis is a vital tool in the diagnostics of cutaneous
T-cell-lymphoma. Especially the improvement of the analytical sensitivity in
order to ensure an early diagnosis was one major goal of this study. To
achieve this, the emphasis was put on improving the loss-free DNA-extraction
from paraffin-embedded samples, as well as optimizing the sensitivity of the
PCR by adjusting the primerapplication-modalities and the choice of
fluorescent-dyes for primer-labelling. The following modifications proved to
be superior to pre-existing protocols: Use of TET for gamma-1-PCR-primer-
labelling and HEX for gamma-2 and an accessory addition of primer (using twice
the initial quantity) after half of the amplification cycles. Using this
protocol on samples of 15 histologically confirmed lymphomas and 15 lymphoma-
resembling dermatoses affirmed the superiority of the newly-established method
compared to older methods such as TGGE. In the second trial, six of fifteen
diagnoses could be revised from monoclonal to oligoclonal due to the higher
resolution of the fragment analysis. Applying the method to a group consisting
of 15 pairs of skin samples, the elder ones being histollogically lymphoma-
negative and the latter positive, showed clonality at three of the older
samples, even before the histological diagnosis. In summary, we were able to
establish a PCR-protocol with a higher sensitivity and improved potential for
early diagnosis than pre-existing methods.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
Cutaneous T-cell lymphoma
dc.subject
Clonality analysis
dc.subject
Gamma-T-cell-receptor
dc.subject
Fragment anaylsis
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Methoden der Klonalitätsanalyse von kutanen T-Zell-Lymphomen Optimierung
vorhandener PCR-Techniken
dc.contributor.firstReferee
Priv.Doz. Dr. rer. nat. A. Lukowsky
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. med. R. Stadler
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. med. H. Kerl
dc.date.accepted
2008-09-19
dc.date.embargoEnd
2008-06-12
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000003739-3
dc.title.translated
Methods of clonality-analysis of cutaneous T-cell lymphoma optimization of
existing PCR-techniques
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
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FUDISS_thesis_000000003739
refubium.mycore.transfer
http://www.diss.fu-berlin.de/2008/318/
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open access