id,collection,dc.contributor.author,dc.contributor.firstReferee,dc.contributor.furtherReferee,dc.contributor.gender,dc.date.accepted,dc.date.accessioned,dc.date.available,dc.date.embargoEnd,dc.date.issued,dc.description,dc.description.abstract[de],dc.description.abstract[en],dc.identifier.uri,dc.identifier.urn,dc.language,dc.rights.uri,dc.subject,dc.subject.ddc,dc.title,dc.title.translated[en],dc.type,dcterms.accessRights.dnb,dcterms.accessRights.openaire,dcterms.format[de],refubium.affiliation[de],refubium.mycore.derivateId,refubium.mycore.fudocsId,refubium.mycore.transfer "0870d328-133c-4847-a0b5-34a7a6acc14b","fub188/13","Vandersee, Staffan Lars Mikael","Priv.Doz. Dr. rer. nat. A. Lukowsky","Prof. Dr. med. R. Stadler||Prof. Dr. med. H. Kerl","n","2008-09-19","2018-06-07T15:44:53Z","2008-05-13T00:00:00.649Z","2008-06-12","2008","Titelblatt und Inhaltsverzeichnis Einleitung Problem- und Zielstellungen Material und Methoden Ergebnisse Diskussion Zusammenfassung Literaturverzeichnis","Der Klonalitätsnachweis mittels Gamma-T-Zell-Rezeptor-DNA-PCR mit anschließender Fragmentanalyse ist ein wesentliches Mittel in der Diagnostik kutaner T-Zell-Lymphome. Insbesondere die Verbesserung des Frühdiagnosevermögens durch Erhöhung der analytischen Sensitivität stellte den Schwerpunkt der vorliegenden Arbeit dar. Es sollte die verlustfreie Gewinnung der DNA aus paraffinisierten Hautproben verbessert, die Sensitivität der PCR durch Veränderungen der Primerapplikationszeitpunkte und Farbstoffauswahl optimiert, sowie das Potenzial dieser PCR zur Frühdiagnostik bestimmt und im Vergleich zu präexistenten Verfahren gesteigert werden. Folgende Modifikationen führten zu einer Sensitivitätsverbesserung der Methode im Vergleich zu bisherigen Standardprotokollen: Verwendung des Farbstoffs TET für die Primermarkierung bei der Gamma-1- und TET bei der Gamma-2-PCR sowie die zusätzliche Zugabe der doppelten Standardprimermenge nach der Hälfte der Amplifikationszyklen der PCR. Die Anwendung dieses Protokolls an Stichproben von jeweils 15 histologisch gesicherten sowie lymphomähnlichen Dermatosen wies ein höheres Vermögen zum Klonalitätsnachweis als vorbestehende Methoden wie die TGGE auf. Aufgrund des höheren Auflösungsvermögens der Fragmentanalyse konnten beim ersten Versuch eine, beim zweiten sechs Diagnoseänderungen zum Vorbefund nachgewiesen werden. Die Applikation des Verfahrens bei einer Stichprobe aus Probenpaaren von 15 Patienten mit einer frühen lymphomnegativen und einer späten lymphompositiven Histologie, zeigte bei drei der frühen Proben Klonalität bevor die Histologie lymphomverdächtig erschien. Zusammenfassend konnte somit ein PCR-Protokoll mit einer verbesserten Sensitivität und Frühdiagnosepotenz im Vergleich zu den bisherigen Verfahren vorgestellt werden.","Clonality-detection by using gamma-T-cell-receptor-DNA-based PCR with consecutive fragment analysis is a vital tool in the diagnostics of cutaneous T-cell-lymphoma. Especially the improvement of the analytical sensitivity in order to ensure an early diagnosis was one major goal of this study. To achieve this, the emphasis was put on improving the loss-free DNA-extraction from paraffin-embedded samples, as well as optimizing the sensitivity of the PCR by adjusting the primerapplication-modalities and the choice of fluorescent-dyes for primer-labelling. The following modifications proved to be superior to pre-existing protocols: Use of TET for gamma-1-PCR-primer- labelling and HEX for gamma-2 and an accessory addition of primer (using twice the initial quantity) after half of the amplification cycles. Using this protocol on samples of 15 histologically confirmed lymphomas and 15 lymphoma- resembling dermatoses affirmed the superiority of the newly-established method compared to older methods such as TGGE. In the second trial, six of fifteen diagnoses could be revised from monoclonal to oligoclonal due to the higher resolution of the fragment analysis. Applying the method to a group consisting of 15 pairs of skin samples, the elder ones being histollogically lymphoma- negative and the latter positive, showed clonality at three of the older samples, even before the histological diagnosis. In summary, we were able to establish a PCR-protocol with a higher sensitivity and improved potential for early diagnosis than pre-existing methods.","https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/1531||http://dx.doi.org/10.17169/refubium-5733","urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000003739-3","ger","http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen","Cutaneous T-cell lymphoma||PCR||Clonality analysis||Gamma-T-cell-receptor||Fragment anaylsis","600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit::610 Medizin und Gesundheit","Methoden der Klonalitätsanalyse von kutanen T-Zell-Lymphomen Optimierung vorhandener PCR-Techniken","Methods of clonality-analysis of cutaneous T-cell lymphoma optimization of existing PCR-techniques","Dissertation","free","open access","Text","Charité - Universitätsmedizin Berlin","FUDISS_derivate_000000003739","FUDISS_thesis_000000003739","http://www.diss.fu-berlin.de/2008/318/"