dc.contributor.author
Weidemann, Wenke
dc.date.accessioned
2018-06-08T00:19:24Z
dc.date.available
2007-01-21T00:00:00.649Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/11782
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-15980
dc.description
Titelblatt und Inhaltsverzeichnis
Zusammenfassung
Summary
Inhaltsverzeichnis
Einleitung
Ergebnisse
Diskussion
Arbeitshypothese und Ausblick
Material und Methoden
Literatur
Anhang
dc.description.abstract
Die vorliegende Arbeit beschreibt Studien zur Funktion der GNE, des
Schlüsselenzyms der Biosynthese von Sialinsäuren. Die GNE bzw. Sialinsäuren
sind essentiell für den Organismus, da GNE-defiziente (KO-) Mäuse embryonal
lethal sind. Das Augenmerk dieser Arbeit liegt auf der Aufklärung der
Regulation dieses Enzyms über seine verschiedenen oligomeren Zustände und auf
der Identifizierung interagierender Proteine. Des Weiteren werden embryonale
Stammzellen (ES-Zellen), die bezüglich der GNE-defizient sind, isoliert und
näher charakterisiert. Mittels Y2H-System wurde die Kinasedomäne der GNE als
wichtige Komponente für die Oligomerisierung identifiziert. Außerdem konnten
mittels Y2H-Screening gegen eine cDNA-Genbank aus fötalem humanem Hirn vier
interagierende Proteine isoliert werden. Diese vier Proteine sind CRMP-1,
PLZF, RIF 1 und KIAA 1549. Die Interaktion von CRMP-1 mit GNE konnte durch Co-
Immunpräzipitationen bestätigt werden. Ebenso konnte die Interaktion von PLZF
mit GNE durch pull down-Assays bestätigt werden. Nach der Isolation
embryonaler Stammzellen wurden diese zunächst genotypisch mittels PCR und
biochemisch mittels Enzym-Assay charakterisiert. Anschließend wurden ihre
Stammzellmarker bestimmt, um die Pluripotenz der Zellen sicherzustellen. Des
Weiteren wurden WT- und KO-ES-Zellen unter serumhaltigen und serumfreien
Bedingungen kultiviert und bezüglich ihrer Sialinsäurekonzentration
(Resorcinol-Assay) und Oberflächensialylierung (FACS) miteinander verglichen.
Anschließend wurden die KO-ES-Zellen mit dem Sialinsäurevorläufer ManNAc
inkubiert, um das Defizit an Sialinsäuren auszugleichen. Dabei wurde
herausgefunden, dass eine Konzentration von 1-3 mM ManNAc ausreichend ist, um
die Sialylierung der KO-ES-Zellen auf das Niveau der WT-ES-Zellen anzuheben.
Die Proliferation der ES-Zellen wurde ebenfalls unter verschiedenen
Kulturbedingungen untersucht, wobei kein Unterschied zwischen WT- und KO-ES-
Zellen festgestellt werden konnte.
de
dc.description.abstract
The available work describes studies for the function of the bifunctional
enzyme GNE, the key enzyme of the biosynthesis of sialic acids. The GNE and/or
sialic acids are essential for the organism, since GNE deficient (KO-) mice
are embryonic lethal. This work focuses on the elucidation of the regulation
of this enzyme over its different oligomeric states and on the identification
of interacting proteins. Additionally murine embryonic stem cells, which are
deficient in GNE were isolated and characterized. Using Y2H system the kinase
domäne of the GNE was identified as important component for oligomerization.
In addition by screening a cDNA gene bank from fetal human brain four
interacting proteins were isolated: CRMP1, PLZF, RIF1 and KIAA1549. The
interaction of CRMP1 with GNE could be confirmed by coimmunoprecipitation.
Likewise the interaction of PLZF with GNE could be verified by pull down
assays. After the isolation of murine embryonic stem cells these were
characterized first genotypically using PCR and biochemically using
radioactive enzyme assay. Subsequently, they were examined for their stem cell
markers, in order to guarantee the pluripotency of these cells. WT and KO
cells were cultivated under FCS containing and serum-free conditions and were
compared concerning their sialic acid content (resorcinol assay) and cell
surface sialylation (FACS). Subsequently, KO stem cells were incubated with
the sialic acid precursor ManNAc, in order to adjust the deficit at sialic
acids. It was found out that a concentration of 1-3 mM ManNAc is sufficient,
to raise the sialylation level of WT stem cells. The proliferation of stem
cells was examined on different culture conditions, whereby no difference
between WT and KO stem cells could be determined.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
UDP-N-acetylglucosamine 2-epimerase/N-acetylmannosamine kinase
dc.subject.ddc
500 Naturwissenschaften und Mathematik::540 Chemie::540 Chemie und zugeordnete Wissenschaften
dc.title
Neue Eigenschaften der UDP-N-Acetylglukosamin 2-Epimerase/N-Acetylmannosamin-
Kinase
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. Rüdiger Horstkorte
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. Fritz G. Rathjen
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. Rupert Mutzel, Prof. Dr. Dietmar Kuhl, D
dc.date.accepted
2006-12-19
dc.date.embargoEnd
2007-01-26
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000002664-0
dc.title.translated
New properties of the UDP-N-acetylglucosamine 2-epimerase/N-acetylmannosamine
kinase
en
refubium.affiliation
Biologie, Chemie, Pharmazie
de
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FUDISS_thesis_000000002664
refubium.mycore.transfer
http://www.diss.fu-berlin.de/2007/45/
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open access