Hintergrund: Die CVID (common variable immunodeficiency) ist ein bisher nur unzureichend geklärtes und erforschtes immunologisches Krankheitsbild, das durch einen Immunglobulinmangel verursacht wird. Verschiedene Ergebnisse in molekularbiologischen Forschungen konnten unterschiedliche Defekte auf genetischer und zellinteraktiver Ebene finden, so dass sich Vermutungen bestätigen, dass die CVID ein gemeinsamer klinischer Phänotyp unterschiedlichster Ursachen ist. Aufgrund dieser Heterogenität ist eine sinnvolle und einfache Klassifikation innerhalb der CVID von großer Bedeutung. Vor einiger Zeit wurde eine neue Klassifikation vorgestellt, die die bisher empfohlene Klassifikation nach Bryant et al. ersetzten könnte. Die Freiburger Klassifikation nimmt die Einteilung durch flowzytometrische B-Zell- Immunphänotypisierung an peripheren mononukleären Blutzellen (PBMC) vor. Ziele: Innerhalb der vorliegenden Arbeit wurden die PBMC von je 10 CVID- Patienten und gesunden Kontrollpersonen untersucht. Ziel war es, diese Klassifikation zu überprüfen. Darüber hinaus beabsichtigten wir, bei einer positiven Überprüfung, diese Methode noch zu vereinfachen. Weiterhin sollten bei der Immunphänotypisierung in Vollblut gängige Marker zur CVID-Diagnostik um neuere Markierungen wie CD31 für „Recent Thymic Emigrants" (RTE, CD31+CD45RA+CD4+ T-Zellen) zur Überprüfung der Thymusfunktion und CD25 für CD4+ regulatorische T-Zellen (TREG, CD25+++CD4+ T-Zellen) ergänzt werden. Aufgrund der Hinweise für die enge Verwandtschaft von CVID und sIgAD, überprüften wir außerdem sIgAD-Patienten auf immunphänotypische Eigenschaften der CVID und deren Zuordbarkeit in die CVID-Klassifikationen. Als eine Ursache von CVID ist ein Defekt des Oberflächenproteins ICOS (inducible co-stimulator) erkannt worden. Die bisherige Testung auf ICOS-Expression erfolgte in PBMC. Ein weiteres Ziel dieser Arbeit war die Entwicklung einer schnelleren und einfacheren Testung in Vollblut. Resultate: Folgende Ergebnisse können zusammengefasst werden: I. Die Freiburger Klassifikation konnte bestätigt werden. Unter Verzicht auf einen Zellmarker (IgD) konnten die gleichen Resultate erhoben werden. Die so modifizierte Klassifizierung wurde im Anschluss an die Studie in die Routinediagnostik des Medizinischen Instituts für Immunologie CCM aufgenommen. II. Bei der Immunphänotypisierung der CVID- Patienten mit etablierten T-Zell-Markern zeigten sich überwiegend die gleichen Resultate wie in vorhergegangenen Studien. Der Anteil an CD4+ RTE zeigte eine signifikante Erhöhung im Vergleich zu den Probanden, wobei der relative Anteil naiver T-Zellen jedoch deutlich verringert war, was (a) gegen einen Thymusdefekt bei unseren Patienten und (b) eher für einen peripheren Verbrauch der T-Zellen spricht. Die Population der CD4+ regulatorischen T-Zellen zeigte weder zu den gesunden Probanden, noch zwischen den Patienten mit und ohne Autoimmunerkrankung einen signifikanten Unterschied. Studien zu möglichen funktionellen Defekten laufen am Medizinischen Institut für Immunologie der Charité. III. Bei der Testung der beiden Patienten mit selektivem IgA-Defekt auf CVID-spezifische funktionelle und phänotypische Eigenschaften zeigte Patient sIgAD-2 sowohl bei den Klassifikationen als auch bei der Immunphänotypisierung eine deutliche Übereinstimmung mit CVID-Patienten. Patient sIgAD-1 war diesbezüglich unauffällig. IV. Die Entwicklung des ICOS- Testes in Vollblut konnte abgeschlossen werden und wurde in die Routinediagnostik des Medizinischen Instituts für Immunologie CCM aufgenommen. Dieses Ergebnis wurde zudem publiziert. Eine Kopie ist im Anhang enthalten.
BACKGROUND: CVID (common variable immunodeficiency syndrome) is an immune mediated disease which is inadequately established and not very well studied so far. It is caused by immunodeficiency. Several biomolecular research brought up different defects at genetic and cell interactive level. This underlines the hypothesis that CVID is a conjoint clinical phenotype with different origins. According to the heterogeneity of defects causing CVID, an expedient and simple classification is of particular importance. The common way to classify CVID due to immunglobulin secretion was described by Bryant et al. In 2002 a new classification due to B cell subpopulation was introduced. The so-called "Freiburg" classification is based on B cell subpopulations classified by flowcytometric B-cell-immunophenotyping at peripheral blood mononuclear cells (PBMC). AIMS: Within this present dissertation PBMC from 10 CVID patients and 10 healty controls were analysed with the intent to verify the "Freiburg" classification. In case of correlation of these classifications we purposed to simplify the "Freiburg" classification. Beside established markers in immunophenotyping analysis of PBMC we added two new markers. We took CD31 as a marker for „Recent Thymic Emigrants" (RTE, CD31+CD45RA+CD4+ T cells) with a view to screen thymic function and according to recent papers we took CD25 for CD4+ regulatory T cells (TREG, CD25+++CD4+ T cells). Due to described relations between CVID and selective IgA deficiency (sIgAD) we analysed PBMC of patients suffering with sIgAD in reference to both immunphenotypic characteristics of CVID patients and classification of CVID. Defect ICOS (inducible co-stimulator) expression is known as a cause for CVID. Until now ICOS detection was made in PBMC. With a view to ease CVID diagnostic we purposed a whole blood ICOS test. RESULTS: Following results can be summarized: I. Freiburg classification could be verified. With passing on one marker (IgD) same results were drawn. This modified classification was picked up to the routine diagnostic program of the Institute of Medical Immunology CCM. II. Immunphenotyping of CVID patients with established markers showed predominantly known results. Absolute CD4+ RTE T cells were significant higher in patients than in probands, relative frequencies of naive T-cells were noticeable decreased. This a) argues against a thymic defects in our CVID patients and (b) concedes the case of peripheral consumption of the T cells. Population of CD4+ regulatory T cells did not show significant differences neither between CVID patients and healthy probands nor between patients with autoimmune disease and those without. Further studies with reference to functional defects are running at the Institute of Medical Immunology CCM. III. One patient with selective IgA deficiency (patient sIgAD-2) did show functional und phenotypic characteristics similar to patients with CVID. Patient sIgAD-1 was not noticeable. IV. The development of the ICOS detection test in whole blood was successful. The test was picked up to the routine diagnostic program of the Institute of Medical Immunology CCM. This result was published. A copy is attached.
