Neurotrophine sind Wachstumsfaktoren. In Säugern modulieren sie nicht nur weitreichende Aspekte der Entwicklung sondern auch Funktionen des erwachsenen Nervensystems. Die Signaltransduktion erfolgt einerseits über den Rezeptor p75NTR andererseits über die Rezeptor-Tyrosinkinasen TrkA, TrkB und TrkC. Während die Signalkaskaden der Trk Rezeptoren weitgehend aufgeklärt wurden, entwickelte sich das Wissen über p75NTR ebenso wie das über die verwandten Mitglieder der ?Tumor Necrosis Factor Rezeptor? (TNFR)-Superfamilie nur langsam. 10 Jahre nach der Klonierung sollten mit dieser Arbeit daher die intrazellulären Interaktoren von p75NTR identifiziert werden. Ebenso wie zur Aufklärung der Signalwege anderer Mitglieder der TNFR-Superfamilie wurden biochemische Reinigungsansätze unternommen. Sowohl die Reinigung des p75NTR- Interaktorkomplexes in Gegenwart extrazellulärer Liganden, als auch die Affinitätsreinigung über die intrazelluläre Domäne sowie die Anreicherung des p75NTR-Interaktorkomplexes in charakterisierten subzellulären Fraktionen wurde vorgenommen. Im Rahmen dieser Arbeit wurden zudem neue Antiseren gegen p75NTR hergestellt. Eines dieser Seren zeigte zusätzliche p75NTR-ähnliche Westernblotsignale. Überraschenderweise konnten diese Signale auch in Gehirnhomogenaten des 1992 hergestellten p75NTR-Teil-Knockout sowie in dem bis dahin nur in unserem Labor zugänglichen ersten vollständigen p75NTR-Knockout detektiert werden. Die Expression der p75NTR-ähnlichen Proteine war auf das Gehirn beschränkt, wurde postnatal stark herunterreguliert und zeigte in differenzieller Zentrifugation starke Kalziumabhängigkeit. Zusätzlich konnte in p75NTR-Knockout-Tieren eine p75NTRähnliche Bindungsstelle identifiziert werden. Die p75NTR-ähnlichen Proteine wurden gereinigt, als N-Terminus von des Mikrotubuli Assoziierten Proteins 1B (MAP1B) identifiziert und die Homologie zu p75NTR untersucht.
Neurotrophins are growth factors. In mammals, they exert a broad range of modulatory effects on developing as well as on mature neurons. Neurotrophinmediated signals are transduced by either the neurotrophin receptor p75NRT or the receptor tyrosine kinases TrkA, TrkB and TrkC. Whereas signaling via the Trkreceptors is quite well understood, even 10 years after its identification there was little known about the function and signaling pathways of p75NTR. The aim of this work was therefore to identify intracellular interactors of p75NTR. A biochemical approach was chosen, as was previously applied to related proteins of the TNFR-family. Three different purification strategies were used: 1) purification of the p75NTR-interactor complex in the presence of its extracellular ligands, 2) affinity purification via the intracellular domain of p75NTR and 3) enrichment of the p75NTR- interactor complex in characterized subcellular fractions. In addition, new antisera against p75NTR were generated and characterized. One antiserum recognized additional p75NTR-like signals on Western blot. Surprisingly, these signals remained strongly detectable in brain homogenates of a partial as well as a complete p75NTR-/- knock out mouse. The p75NTR-like antigens were expressed exclusively in the central nervous system, were strongly downregulated during postnatal development and showed calcium-dependent segregation during centrifugation. In addition, a p75NTR-like binding site was detected in dissociated dorsal root ganglia of the complete p75NTR knock out mouse. The p75NTR?like antigens were purified, identified as the N-terminus of the microtubule associated protein MAP1B and the homology to p75NTR was investigated.
