Die Agglutinationstechnik stellt seit mehr als 100 Jahren die einfachste und schnellste Methode zum Nachweis zellulärer Antigene und Antikörper dar. Die Anwendung und Weiterentwicklung dieser Technik hat sich bisher nur in der Erythrozyten-Serologie bewährt. Das Ziel der vorliegenden Arbeit ist es daher, klinisch relevante Polymorphismen mittels einfacher Agglutinationstests zu erfassen. Durch die Verwendung braun gefärbter, paramagnetischer Partikel wurde der primär für die Erythrozyten-Serologie konzipierte und etablierte Gelzentrifugationstest zur Bestimmung thrombozytärer und leukozytärer Polymorphismen weiterentwickelt. Es ist uns gelungen, die aus der Polymerase- Ketten-Reaktion (PCR) resultierenden PCR-Produkte von humanen Plättchen- (HPA) und humanen Leukozyten-Antigenen (HLA) in neuen Partikel-Gel-Agglutinations- Assays (PaGIA) nachzuweisen. Es wurden 1 400 HPA- und 1 564 HLA-Proben untersucht. Die Ergebnisse des neuen PaGIA zeigten im Vergleich zur PCR-SSP (PCR-Sequence-specific-primer) bzw. konventionellen Gelelektrophorese eine hundertprozentige Übereinstimmung. Neben der Anwenderfreundlichkeit und der Zeitersparnis hat die Darstellung von PCR-Amplifikationen mithilfe gefärbter Partikel im PaGIA gegenüber der Gelelektrophorese den Vorteil, dass hier ohne kanzerogene Agenzien wie Ethidiumbromid gearbeitet werden kann. In einer weiteren Anwendung zur Phänotypisierung des granulozytären Antigens HNA-1a von Blutspendern (n=147) mit paramagnetischen Partikeln zeigten die Ergebnisse ebenfalls eine hundertprozentige Korrelation mit den molekularbiologischen Untersuchungen in der PCR. Die Ergebnisse dieser Arbeit verdeutlichen das Potential der PaGIA für die Routinediagnostik, die sich durch die hohe Sensitivität und Spezifität sowie in Rentabilität und Schnelligkeit auszeichnet.
The agglutination technique has presented the simplest and fastest method of providing evidence of cellular antigens and antibodies for more than 100 years. The use and further development of this technique has so far only stood the test in the erythrocyte serology. The aim of the present paper is therefore to record polymorphisms using simple agglutination tests. Using brown coloured, paramagnetic particles, the gel centrifugation test, primarily designed and established for the erythrocyte serology, was further developed to determine thrombocytic and leukocytic polymorphisms. The PCR products of human platelet antigens (HPA) and human leukocyte antigens (HLA) resulting from the polymerase chain reaction were able to be demonstrated in new particle gel agglutination assays (PaGIA). 1,400 HPA and 1,564 HLA samples were analysed. The results of the new PaGIA showed a one hundred percent correlation in comparison to the PCR-SSP (PCR sequence-specific primer) or conventional gel electrophoresis. In addition to the user-friendliness and time-savings, the illustration of the PCR amplifications using coloured particles in the PaGIA in comparison to gel electrophoresis has the advantage that this method does not require carcinogenic agents such as ethidium bromide. In a further use to phenotype the granulocytic antigens HNA-1a of blood donors (n=147) with paramagnetic particles, the results also showed a one hundred percent correlation with the molecular-biological tests in the PCR. The results of this paper illustrate the potential of the PaGIA for routine diagnostics which are characterised by high sensitivity and specificity as well as profitability and speed.
