dc.contributor.author
Wotschofsky, Zofia
dc.date.accessioned
2018-06-07T22:08:47Z
dc.date.available
2014-01-21T12:36:34.813Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/8914
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-13113
dc.description.abstract
Hintergrund/Zielstellung: MicroRNAs (miRNAs) sind nicht-kodierende RNAs mit
einer Basenlänge von ca. 22 Nukleotiden. Es wird angenommen, dass sie 30 %
aller Gene regulieren und eine wichtige Rolle bei der Krebsentstehung und
-progression spielen. Der Wissensstand zur Bedeutung der miRNAs im
klarzelligen Nierenzellkarzinom war zu Beginn meiner Doktorarbeit sehr
begrenzt, sodass die Aufgabe darin bestand, deren mögliches diagnostisches und
prognostisches Potential für das Nierenzellkarzinom zu ermitteln. Methodik:
Microarray-Analysen von Proben aus Karzinom- und umgebenden Normalgewebe, die
nach radikaler Nephrektomie gewonnen wurden, sowie von Knochenmetastasen-
Gewebe von metastasierten Nierenzellkarzinom-Patienten wurden in einer
exploratorischen Studie durchgeführt. Die folgenden Validierungen erfolgten
mit der quantitativen reversen Transkriptions-Polymerase-Kettenreaktion (RT-
qPCR). Verschiedene spezielle Software (geNorm, NormFinder,
Prädiktionssuchmaschinen) und Statistikprogramme wurden für die Auswertung der
Daten genutzt. Ergebnisse: In der ersten Studie wurden die miR-28, miR-103 und
die miR-106a als die in den verschiedenen Gewebeproben am stabilsten
exprimierten miRNAs ermittelt. Die miRNA-Kombinationen aus der miR-28, miR-103
und miR-106a bzw. aus der miR-28 und miR-103 wurden als geeignete Referenz-
miRNAs-Kombinationen für die relative Quantifizierung ermittelt. Bei
Gewebematerialmangel kann auch die miR-28 als EinzelmiRNA eingesetzt werden;
die oftmals genutzte RNU6B erwies sich als ungeeignetes Referenzgen. In der
zweiten Studie wurden, basierend auf den o.g. Normalisierungsansätzen, 30
deregulierte miRNAs zwischen den Tumor- und den Normalgewebeproben
identifiziert und mit der RT-qPCR validiert. Eine stufenweise verminderte
miRNA-Expression vom Normalgewebe über das primäre Tumorgewebe zum
Metastasengewebe war typisch. Nur sechs miRNAs zeigten eine erhöhte Expression
im Metastasengewebe im Vergleich zum Normalgewebe. Siebzehn miRNAs wurden als
neue miRNAs entdeckt, die mit der Metastasierung des Nierenzellkarzinoms
assoziiert sind und bisher in anderen Studien nicht beschrieben wurden.
Basierend auf diesen Daten und vorhergehenden Ergebnissen wurden jeweils im
Vergleich zum Normalgewebe vier stark über- bzw. unterexprimierte miRNAs in
Karzinomgewebeproben von Nephrektomiepräparaten bei Patienten ohne (n=89) und
mit (n=22) Metastasen gemessen. Alle miRNAs erwiesen sich als geeignet,
malignes von nicht-malignem Gewebe zu differenzieren. Die beiden miRNAs
miR-122 und miR- 514 korrelierten signifikant mit dem Auftreten eines
Tumorrezidivs nach der Nephrektomie. Im Cox-Regressionsmodell mit klinisch-
pathologischen Standardvariablen erwies sich die miR-514 als eine signifikante
unabhängige Variable. Schlussfolgerungen: Basierend auf den vorliegenden
Studien kann geschlussfolgert werden, dass miRNA-Expressionsdaten nicht nur
eine wichtige Ergänzung zu den diagnostischen und prognostischen Informationen
durch die konventionellen klinischpathologischen Kenngrößen darstellen. Sie
ermöglichen außerdem neue, bisher verborgene Einsichten in molekulare Prozesse
der Krebsprogression und bieten damit neue Forschungsansätze auch in der
Therapie.
de
dc.description.abstract
Background/Objective: MicroRNAs (miRNAs) are non-protein coding RNAs of
approximately 22 nucleotides and are involved in the regulation of about 30%
of all genes. They play an important role in cancerogenesis and cancer
progression. Since their significance in clear cell renal cell carcinoma
(ccRCC) was limited at the beginning of my doctoral thesis, it was the aim to
evaluate the diagnostic and prognostic potential of miRNAs in ccRCC. Methods:
Microarray analyses of miRNAs from normal and cancerous samples of ccRCC
tissue collected after radical nephrectomy and from bone metastases of ccRCC
patients were performed to identify both invariant miRNAs as potential
referencemiRNAs for relative quantification and differentially expressed
miRNAs as diagnostic and prognostic indicators. The validation studies were
performed by quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-
qPCR) analyses. Different special software (geNorm, NormFinder, prediction
tools) and standard statistical programs were used for calculations. Results:
In the first study, miR-28, miR-103 and miR-106a were proved as the most
stably expressed miRNAs in the different tissue samples. Consequently, the
combinations of miR-28, miR-103, and miR-106a or miR-28 and miR-103 were
recommended as preferred normalizer approaches for relative quantification.
MiR-28 could be used as single normalizer in case of shortage of sample
material while RNU6B that is frequently used was unsuitable as normalizer. In
the second study, 30 miRNAs were identified to be particularly deregulated
between tumor and normal tissue samples. A stepwise down-regulation of miRNA
expression from normal over primary tumor to metastatic tissue was typical
while only six miRNAs were up-regulated in metastatic tissue in comparison to
normal tissue. Seventeen miRNAs were detected as novel miRNAs associated with
ccRCC metastasis that were not recognized as such in previous studies. Based
on these and previous findings, four up-regulated and four down-regulated
miRNAs in malignant and non-malignant samples after nephrectomy from patients
without (n=89) and with (n=22) metastases were measured. All miRNAs were found
to be suitable indicators to differentiate malignant from non-malignant
tissue. MiR-122 and miR-514 were significantly related to the recurrence risk
after nephrectomy and miR-514 was an independent prognostic variable in a
final Coxregression model together with clinicopathological variables.
Conclusions: Based on these studies, it could be shown that miRNA expression
data not only results in promising diagnostic and prognostic information in
completion to conventional clinicopathological data. They also provide novel
insights in yet unknown molecular processes of cancer progression and offer
new therapeutic strategies.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
clear cell renal cell carcinoma
dc.subject
reference genes
dc.subject
recurrence risk prediction
dc.subject
prognostic markers
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Deregulierte microRNAs und deren diagnostische und prognostische Bedeutung
beim klarzelligen Nierenzellkarzinom
dc.contributor.firstReferee
N.N.
dc.contributor.furtherReferee
N.N.
dc.date.accepted
2014-02-14
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000095576-5
dc.title.translated
Deregulated microRNAs and their diagnostic and prognostic impact in clear cell
renal cell carcinoma
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000095576
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000014427
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access