dc.contributor.author
Strunck, Anna-Carina
dc.date.accessioned
2018-06-07T21:39:42Z
dc.date.available
2003-07-20T00:00:00.649Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/8243
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-12442
dc.description
Titel / Inhaltsverzeichnis
1\. Einleitung
1.1. Der humane polymorphkernige neutrophile Leukozyt 2
1.2. Die Rolle der PMN in Entzündungsreaktionen 3
1.3. Aktivatoren der PMN 5
1.4. Die Signaltransduktion in PMN 8
1.5. Der Aufbau und die Bedeutung der Phospholipasen A2 14
1.6. Der Arachidonsäurestoffwechsel 23
1.7. Zielsetzung der Arbeit 25
2\. Material und Methoden 27
2.1. Material 27
2.2. Methoden 29
3\. Ergebnisse 35
3.1. Westernblots zur Detektion der PLA2 35
3.2. Die Effekte der PLA2-Inhibitoren auf die AA-Freisetzung 36
3.3. Die zeitabhängige AA-Freisetzung in PMN 43
3.4. Die Bildung von 5-LOX Produkten in PMN 47
3.5. Die Beeinflussung der [Ca2+]i in fMLP-stimulierten PMN 55
3.6. Die Superoxidanionenfreisetzung in PMN
62
4\. Diskussion 63
4.1. Übersicht der Aufgabenstellung 63
4.2. Die Detektion der verschiedenen PLA2 63
4.3. Der Einfluß der verschiedenen PLA2 und der PLD auf die AA-Freisetzung in
fMLP-stimulierten PMN 64
4.4. Der zeitliche Verlauf der AA-Freisetzung 65
4.5. Der Einfluß der [Ca2+]i auf die Signaltransduktion in fMLP-stimulierten
PMN 66
4.6. 5-LOX-Produktion in mit Staurosporin-vorbehandelten PMN 67
4.7. Dissoziation zwischen AA-Produktion und LTB4-Freisetzung 69
Literaturverzeichnis 73
Index 90
Lebenslauf 94
dc.description.abstract
Leuktrien B4 (LTB4) ist ein wichtiger proinflammatorischer Mediator, der in
neutrophilen Granulozyten (PMN) produziert wird und in diesen Zellen besonders
starke chemotaktische Aktivität aufweist. Deswegen scheint dieses Eicosanoid
eine besondere Rolle bei der Rekrutierung von PMN in Entzündundsreaktionen zu
spielen.
PMN besitzen eine Vielzahl von Rezeptoren, die am Priming und an der
Zellaktivität beteiligt sind. Unter Priming versteht man eine Konditionierung
der Zellen, durch die ein anderer Stimulus eine verstärkte Aktivität der
Zellen hervorrufen kann. Einer von diesen Rezeptoren ist der
Formyltripeptidrezeptor (FPR). Er vermittelt sowohl Chemotaxis als auch die
Aktivierung des Nicotinamidadenindinukleotidphosphat-Oxidasesystems (NADPH-
Oxidasesystems). Es ist bekannt, daß hierbei die LTB4?Synthese nur wenig
angeregt wird, obwohl sowohl Arachidonsäure (AA) freigesetzt als auch die
intrazelluläre Kalziumkonzentration (Cai2+) stark erhöht wird, beides
Faktoren, die für die LTB4-Formation gebraucht werden.
Um diesen Widerspruch aufzuklären, wurden die Freisetzung von AA und die
LTB4-Synthese in mit 14C-AA markierten PMN unter Verwendung von verschiedenen
Inhibitoren des Phospholipidstoffwechsels untersucht.
Die Ergebnisse zeigten, daß der größte Anteil der AA-Freisetzung durch die
cytosolische Phospholipase A2 Gruppe IVa (cPLA2) und die Phospholipase D (PLD)
ausgelöst wurde, während die sekretorische Phospholipase A2 (sPLA2) keine
Rolle zu spielen scheint. Durch die Hemmung der Phosphohydrolase der
Phosphatidsäure (PA) mit Propranolol kam es zum Abfall der AA-Freisetzung,
jedoch zum Anstieg der 5-Lipoxygenase-Aktivität (5-LOX?Aktivität). Eine
Inhibition der NADPH-Oxidase-Aktivität verursachte einen leichten Anstieg der
5-LOX-Produkte.
Die Länge und Stärke des Kalziumsignals sind scheinbar die kausalen Faktoren
für die fMLP-induzierte LTB4-Synthese. Weder die freie AA noch die
enzymatische Aktivität der 5-LOX sind die limitierenden Faktoren für die fMLP
induzierte Produktion des LTB4.
de
dc.description.abstract
Leukotriene B4 (LTB4) is an important proinflammatory mediator which is
produced by neutrophils (PMN) and exhibits potent chemotactic activity towards
various inflammatory cells. Therefore this eicosanoid is believed to play a
central role in the recruitment of PMN at inflammatory sites. PMN posesses a
number of receptors that are essential for priming and activation of their
functions (Priming means a treatment that does not itself elicits a response
in a cellsystem but induces an enhanced capacity of a cell to respond to a
second stiumulus). One of the receptors is the formyl tripeptide receptor
(FPR) the agonists of which cause both chemotaxis and activation of the NADPH
oxidase system. However, formyl peptides such as formyl-methionyl-leucyl-
phenylalanine (fMLP) are known to be inducers of LTB4-synthesis in human PMN,
albeit they cause both rise of cytosolic calcium concentration and liberation
of arachidonic acid (AA). Both of them are required for LTB4 formation.
To elucidate this discrepancy, we investigated AA-release and LTB4 synthesis
from 14C-AA prelabelled cells by the use of various inhibitors of the
phospholipid metabolism.
From our results we conclude that the major part of AA-release is triggered by
cytosolic phospholipase A2 (cPLA2) and phospholipase D (PLD) pathways without
any involvement of secretory phospholipases A2 (sPLA2). The blockade of
phosphatidic acid (PA) phosphohydrolase by propranolol in the PLD pathway
leads to a decrease in AA-release and concomitantly to a significant increase
in LTB4?synthesis. Inhibition of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate
(NADPH) oxidase activity caused only slight enhancement of the LTB4 formation.
We believe, that the extent and duration of the cytosolic Ca2+ signal, and not
the overall supply of free AA or 5?lipoxygenase activity (5?LOX acitivity),
are limiting factors for the fMLP-elicited LTB4-synthesis.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
arachidonic acid
dc.subject
phospholipase A2
dc.subject
leukotriene B4
dc.subject
phospolipase D
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Studien über die Aktivierung der Phospholipasen in N-Formyl-Methionin-Leucin-
Phenylalanin stimulierten humanen neutrophilen Granulozyten
dc.contributor.firstReferee
Dr. Dr. Dr. hc Santosh Nigam
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. Roland Seifert
dc.date.accepted
2003-07-01
dc.date.embargoEnd
2003-07-30
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-2003001867
dc.title.subtitle
Dissoziation zwischen Arachidonsäurefreisetzung und Leukotrien B4-Synthese
dc.title.translated
Studies about the Activation of the Phospholipases in N-Formyl-Methionin-
Leucin-Phenylalanin Stimulated Human Neutrophils
en
dc.title.translatedsubtitle
Dissociation between Release of Arachidonic Acid and Leukotriene B4-Synthesis
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
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FUDISS_thesis_000000001020
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