dc.contributor.author
Follmann, Elena
dc.date.accessioned
2018-06-07T20:26:17Z
dc.date.available
2008-10-24T10:31:41.001Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/6839
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-11038
dc.description.abstract
Im Rahmen der hier vorliegenden Arbeit konnte erstmals gezeigt werden, dass
das Teecatechin EGCG die endotheliale NO-Synthase von Endothelzellen
aktiviert. Dies geschieht wahrscheinlich über einen PI3-K, PKA und Akt-
abhängigen Signalweg, der zu einer Phosphorylierung der eNOS an Ser1179 führt.
Zunächst konnte an Rattenaortenringen eine EGCG-induzierte, dosisabhängige
Vasorelaxation nachgewiesen werden, die bis zu einer EGCG-Konzentration von 25
µM endothel- und NO-abhängig war. Die Stimulation zweier verschiedener
Endothelzelltypen mit EGCG führte zu einer dosisabhängigen Aktivierung der
eNOS, was durch einen eNOS-Aktivitätstest in lebenden Zellen nachgewiesen
werden konnte. Durch Western Blots konnte gezeigt werden, dass bei dieser
schnellen eNOS-Aktivierung eine Phosphorylierung des Enzyms involviert ist.
Eine 15-minütige Inkubation mit 100 µM EGCG führte zu einer Phosphorylierung
von eNOS an Ser1179, von Akt an Ser473 und von ERK1/2 an Thr202/Tyr204. Die
Aktivierung der eNOS und Phosphorylierung von Ser1179 wurden durch 30-minütige
Vorinkubation der Zellen mit PI3-K-Inhibitoren (LY 294002, Wortmannin)
vollständig gehemmt. Inkubation mit Inhibitoren der PKA (PKI) oder der Akt
(SH-5) senkten die EGCG-induzierte eNOS-Aktivierung partiell. SH-5 verhinderte
sowohl die Phosphorylierung der Akt an Ser473, als auch die Phosphorylierung
der eNOS an Ser1179. Obwohl PKI keinen Einfluss auf die Phosphorylierung
dieser Stellen hatte, hemmte es die Erhöhung der Aktivität des Enzyms durch
EGCG. Im PKA-Assay konnte eine EGCG-induzierte Aktivierung der PKA
nachgewiesen werden. PD98059, ein Inhibitor der ERK1/2, hatte keinen Einfluss
auf die Aktivierung und die Ser1179-Phosphorylierung der eNOS. Eine Behandlung
von BAECs und CPAEs mit verschiedenen EGCG-Konzentrationen über 24
beziehungsweise 72 h hatte keine Auswirkungen auf die eNOS-Proteinmenge in der
Zelle. Diese Ergebnisse legen den Schluss nahe, dass die schnelle Aktivierung
der eNOS durch EGCG durch eine Phosphorylierung von eNOS an Ser1179 bedingt
ist. Offensichtlich sind mehrere Kinasen involviert, die möglicherweise
parallel an verschiedenen eNOS-Phosphorylierungsstellen wirken. Welche Kinasen
letztendlich welche Aminosäuren der eNOS phosphorylieren, muss in weiteren
Versuchen geklärt werden.
de
dc.description.abstract
In the present study, we provide the first experimental evidence that the tea
catechin EGCG induces an activation of the endothelial NO-synthase in
endothelial cells, probably via a PI3-K-, PKA- and Akt-dependent pathway, that
leads to phosphorylation of eNOS at Ser1179. We observed an EGCG-induced,
dose-dependent vasodilation of the rat aorta, which remained endothelium-
dependent up to an EGCG-dose of 25 µM. Stimulation of two different types of
endothelial cells lead to dose-dependent activation of eNOS. The western blot
analysis showes, that 15 min stimulation of bovine aortic endothelial cells
with 100 µM of EGCG leads to phosphorylation of eNOS at Ser1179, Akt at 473
and ERK1/2 at Thr202/Tyr204. Activation of eNOS and phosphorylation at Ser1179
were completely inhibited by previous incubation of the cells with
PI3-K-inhibitors (LY294004, wortmannin). Incubation with inhibitors of PKA
(PKI) or Akt (SH-5) decreased EGCG-induced eNOS-activation partially. SH-5
prevented phosphorylation of Akt at Ser473 as well as phosphorylation of eNOS
at Ser1179. PKI had no influence on the phosphorylation of these sides, but it
inhibited EGCG-induced increase of eNOS-activity. PD98059, an inhibitor of
ERK1/2, did not affect EGCG-induced activity of eNOS and phosphorylation at
Ser1179. Treatment of BAECs and CPAEs with different concentrations of EGCG
for 24 or 72 hours had no influence on the content of eNOS-protein in these
cells. These results suggest that rapid EGCG-induced eNOS-activation is
conditioned by a phosphorylation of eNOS at Ser1179. Obviously there are
different kinases involved, which act parallel on different phosphorylation-
sites of eNOS. Which kinases are finally responsible for the phosphorylation
of different sites has to be investigated in further experiments.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
EGCG (epigallocatechin-gallate)
dc.subject
eNOS (endothelial NO-synthase)
dc.subject
signaltransduction
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Wirkung von Epigallocatechin-Gallate (EGCG) auf die Endothelfunktion und
Untersuchung molekularer Mechanismen
dc.contributor.contact
elena.follmann@web.de
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. med. Verena Stangl
dc.contributor.furtherReferee
Priv.-Doz. Dr. V. Böhm
dc.contributor.furtherReferee
Priv.-Doz. Dr. med. habil. M. Faßhauer
dc.date.accepted
2008-11-21
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000005673-3
dc.title.translated
Effects of Epigallocatechin-gallate (EGCG) on endothelial function and
underlying molecular mechanisms
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000005673
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000004513
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access