Versuche zur Identifizierung eines aus der bovinen Nebenniere isolierten Trinukleotids: Alarmrufsysteme und Vigilanz in polyspezifischen Assoziationen

Abstract

Im Laufe der Forschungen zu der Ätiologie und Pathogenese der primären Hypertonie wurde die blutdrucksteigernde Rolle von vasoaktiven Nukleotiden entdeckt. Auf der Suche nach jenen vasokonstrigierend wirkenden Substanzen in endokrinen Geweben und Zellen wurde ein Nukleotid unbekannter chemischer Struktur aus der bovinen Nebenniere isoliert. Ziel der vorliegenden Arbeit war die vollständige Identifizierung dieses Nukleotids, dem in vorangegangenen Untersuchungen die Molekülmasse von 973 Da und die Bausteine Guanosinphosphat sowie zwei Cytidinphosphat-Moleküle zugeordnet werden konnten. Für die Identifizierung der Substanz wurde eine neue biochemisch-analytische Methodenkombination angewandt. Hierzu wurden die zu analysierenden Substanzen mit immobilisierten Enzymen mit bekannter Substratspezifität inkubiert und die Reaktionsprodukte mit der MALDI-Massenspektrometrie nachgewiesen. Als Enzyme wurden alkalische Phosphatase, 3´-Phosphodiesterase und 5'-Phosphodiesterase eingesetzt. Es konnte festgestellt werden, dass das untersuchte Trinukleotid eine randständige Phosphatgruppe sowie 3'- und 5'- Phosphoesterbindungen besitzt. Da sich im Verlauf der durchgeführten Untersuchungen vier Isomere als theoretisch mögliche Strukturformeln des gesuchten Trinukleotids erwiesen, liegt die Vermutung nahe, dass es sich dabei nicht um eine reine Substanz, sondern um ein Isomerengemisch handelt. Um eine endgültige Identifizierung des betreffenden Trinukleotids zu erreichen, sollten neue, verbesserte Methoden der Substanzreinigung erarbeitet werden.

In the course of the research to the etiology and pathogenesis of primary hypertonia the blood pressure-increasing role of vasoaktive nucleotides was discovered. On the search for those vasoconstringing substances in endocrine fabrics and cells a nucleotide of unknown chemical structure was isolated from the bovine suprarenal body. The goal of the dissertation was the complete identification of this nucleotide, to which in preceding investigations could be assigned the molecule mass of 973 Da and the components Guanosine-phosphate as well as two Cytidine-phosphate molecules. For identification of the substance was used a new combination of biochemical-analytic methods. The substances, which had to be analyzed, were incubated with immobilized enzymes with known substrate-specificity, and the reaction products were proven with the MALDI-Mass Spectrometry. As enzymes were used the alkaline phosphatase, the 3'-phosphodiesterase and the 5'-phosphodiesterase. It could be determined, that the examined trinucleotide possesses an edge-standing phosphate group as well as 3' \- and 5' - phosphoester bonds. In the process of the executed investigations four isomers proved to be theoretically possible structural formulas of the looked for the trinucleotide. Thus the assumption is obvious, that it concerns not a pure substance, but an isomer mixture. In order to achieve a final identification of the trinucleotide, new, improved methods of the substance cleaning should be developed.