Hintergund: Das Ziel dieser Arbeit war die Untersuchung einer geschlechtsspezifischen Antwort von Immunzellen, insbesondere von Mikro- und Makrogliazellen, im Tiermodell der laserinduzierten choroidalen Neovaskularisation (CNV). Mikrogliazellen zeigen physiologisch und in bedeutenden neurodegenerativen Erkrankungen geschlechtsspezifische Unterschiede in Morphologie und Funktion. Darüber hinaus wurde die Pathologie der CNV geschlechtsspezifisch in vivo und ex vivo betrachtet. Methoden: Untersucht wurden 8 Wochen alte C57Bl/6J-Wildtyp-Mäuse beider Geschlechter. Die Laser-induzierte CNV wurde mittels Argonlaser mit jeweils einem Laserspot pro Netzhaut-Quadranten um den Sehnervkopf durchgeführt. Die Quantifizierung der Pathologie erfolgte in vivo 7 und 14 Tage nach Laser mittels bildgebender Methoden wie OCT, Fluoreszenz-Angiographie, Autofluoreszenz und Infrarotreflexion in verblendeter Form. 15 Tage nach Laser wurde ex vivo die Mikrogliadichte in der Retina und Choroidea, das CNV-Volumen in der Choroidea sowie die In-tensität an VEGF- und GFAP als Zeichen für Vaskulogenese und Gliazellaktivität manuell und verblindet als arithmetisches Mittel erfasst. Die immunhistologischen Färbungen wurden an Paraffinschnitten und Flachpräparaten mit den Antikörpern anti-Iba1, anti-P2YR12, anti-GFAP, anti-VEGF, anti- CD 102 und Isolectin B4 erzeugt. Ergebnisse: 7 Tage nach Laser konnte eine erhöhte Fundusautofluoreszenz pro Laserkoagulation bei den Männchen als Zeichen für eine erhöhte Phagozytose ermittelt werden. Zudem zeigte sich eine deutlichere Gliose (GFAP) und Angiogenese (VEGF-A) bei den Männchen. Für die anti-Iba1-, und anti-P2YR12-Färbung ließ sich eine erhöhte Mikrogliadichte und Migration im Vergleich zu ungelaserten Tieren erheben, jedoch ohne geschlechtsspezifischen Unterschied. Die weitere Bildgebung in vivo und immunhistochemische Untersuchungen der CNV ex vivo wiesen keine Anzeichen für geschlechtsspezifische Unterschiede in der Pathologie auf. Aufgrund methodischer Limitationen wurden Wiederholungsexperimente mit erneuter anti-Iba1-, anti-GFAP- sowie anti-Vimentin-Färbung innerhalb der Arbeitsgruppe durchgeführt. Männchen zeigten sich hier phänotypisch reaktiver und wiesen ein größeres Zellsoma auf. Ebenfalls wurde eine differente Expression von GFAP gefunden, die mit einer gesteigerten Gliose bei Weibchen zum Zellschutz in Verbindung steht. Schlussfolgerung: Zusammenfassend konnten geschlechtsspezifische morphologische und funktionelle Unterschiede in Mikroglia bestätigt werden. Die Ergebnisse spornen dazu an, die Immunantwort und Neuroinflammation der CNV bzw. exsudativen AMD genauer zu erforschen.
Background: The aim of this study was to investigate a sex-specific response of immune cells, in particular micro- and macroglia, in the animal model of laser-induced choroidal neovascularization (CNV). Microglia show sex-specific differences in morphology and function physiologically and in major neurodegenerative diseases. In addition, the pathology of CNV was analyzed sex-specifically in vivo and ex vivo. Methods: 8-week-old C57Bl/6J wild-type mice of both sexes were analyzed. Laser-induced CNV was performed using an argon laser with one laser spot per retinal quadrant around the optic nerve head. Pathology was quantified in vivo 7 and 14 days after laser using imaging methods such as OCT, fluorescein angiography, autofluorescence and infrared reflectance in a blinded fashion. 15 days after laser, the microglia density in the retina and choroid, the CNV volume in the choroid and the intensity of VEGF and GFAP as a sign of angiogenesis and Glia cell activity were recorded ex vivo manually and blinded as an arithmetic mean. Immunohistochemical staining was performed on paraffin sections and flat mounts with the following antibodies: Anti-Iba1, anti-P2YR12, anti-GFAP, anti-VEGF, anti-CD 102 and isolectin B4. Results: 7 days after laser, increased fundus autofluorescence per laser coagulation was detected in the males as a sign of increased phagocytosis. In addition, gliosis (GFAP) and angiogenesis (VEGF-A) were more pronounced in the males. For anti-Iba1 and anti-P2YR12 staining, increased microglial density and migration were observed compared to non-lasered animals, but without gender-specific differences. Further imaging in vivo and immunohistochemical analyses of CNV ex vivo showed no evidence of sex-specific differences in pathology. Due to methodological limitations, additional experiments with renewed anti-Iba1, anti-GFAP and antivimentin staining were performed within the working group. Males were phenotypically more reactive and had a larger cell soma. A differential expression of GFAP was also found, which is associated with increased gliosis in females for cell protection. Conclusion: In summary, sex-specific morphological and functional differences in microglia were confirmed. The results encourage further research into the immune response and neuroinflammation of CNV and exudative AMD.
