In der vorliegenden Arbeit sollten dendritische Zellen (DC) aus der Haut von Pferden isoliert und aus Monozyten differenziert und charakterisiert werden. Zu diesem Zweck war es zunächst notwendig, die eq.Zytokine, Granulozyten- Makrophagen Kolonie-stimulierender Faktor (GM-CSF), Interleukin 4 (IL-4) und Interferon g (IFN g) herzustellen. Eq.GM-CSF wurde zunächst mit Hilfe von Consensusprimern, die aus anderen Spezies abgeleitet wurden, amplifiziert und hergestellt. Nach Durchführung des RACE-Verfahrens konnte eine Punktmutation (Deletion) im Bereich des 3´Primers erkannt werden, die dazu führte, daß die Proteinsequenz 8 Aminosäuren länger ist als bei anderen bekannten Spezies. Bei eq.IL-4 stellte sich heraus, daß die veröffentlichten Sequenzinformationen nicht korrekt waren, da sie Deletionen enthielten. Lediglich die Sequenzinformationen zu eq.IFNg konnten bis auf eine Punktmutation bestätigt werden. Um aktive rekombinante Proteine herzustellen, wurden pro- und eukaryotische Expressionssysteme verwendet. Im bakteriellen System konnte für alle Zytokine eine Überexpression gezeigt werden. Sie zeigten jedoch aufgrund des gewählten Expressionssystemes keine biologische Aktivität. In mammalia Zellen exprimierte Zytokine waren bioaktiv. Langerhans Zellen (LC) konnten aus der Epidermis isoliert und morphologisch untersucht werden. Die Ausbeute war jedoch sehr gering. Die beim Pferd isolierten peripheren Blutmonozyten (PBM) wurden mit rekombinanten Zytokinen differenziert. Diese monozytären Zellen wurden morphologisch und funktionell charakterisiert. Mit eq.IFNg stimulierte Monozyten zeigten Charakteristika von Makrophagen (große adhärente Zellen mit hochregulierter MHC II Expression). In licht- und elektronenmikroskopischen Untersuchungen sowie Analysen der Oberflächenproteine im Durchflußzytometer zeigten die mit eq.GM-CSF und eq.IL-4 stimulierten Monozyten Ähnlichkeit zu den humanen MoDC (Schleierzellen mit Ausläufern mit hochregulierter MHC II und CD86 Expression). Tests in der gemischten Leukozytenreaktion zeigten, daß die MoDC Stimulationskapazität für T Zellen besaßen.
In this thesis, dendritic cells (DC) should be isolated from the skin of horses. Additionally monocytes should be differentiated to DC and characterised. For this purpose, it was necessary to produce the equine (eq.) cytokines, granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), interleukin 4 (IL-4) and interferon g (IFNg). With the help of consensus primers from other species, eq.GM-CSF was amplified and produced. After the RACE-procedure, a point mutation (deletion) along a section of the 3´primer, which resultated in a protein sequence 8 amino acids longer than other known species, was identified. The published sequence information of eq.IL-4 was revealed to be incorrect because it contained deletions. Only the sequence information for eq.IFNg -except for one point mutation- could be confirmed. To produce active recombinant proteins, both prokaryotic and eukaryotic expression systems were used. In the bacterial system an over expression of all cytokines was possible but, due to the system chosen, had no biological activity. The expressed cytokines from mammalia cells were bioactive. Langerhans cells (LC) isolated from the epidermis were examined morphologically, however the cell yield was very low. The isolated peripheral blood monocytes (PBM) from horses were differentiated with the recombinant cytokines. These monocytic cells were characterised morphologically as well as functionally. Eq. IFNg stimulated monocytes showed characteristics of macrophages (large adherent cells with highly regulated MHC II expression). Using light- and electron- microscopic thechniques as well as analysis of the surface proteins by flow cytometry, there was found similarity between the eq .GM-CSF and the eq.IL-4 stimulated monocytes with human MoDC (veiled cells with pseudopodia and with highly regulated MHC II/CD86 expression). Tests of the mixed leukocyte reaction showed that the MoDC possessed stimulation capacity for T cells.