dc.contributor.author
Lettau, Marie
dc.date.accessioned
2018-06-07T17:14:00Z
dc.date.available
2017-05-31T09:54:06.120Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/3582
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-7782
dc.description.abstract
Gedächtnis-B-Zellen zählen zu den Hauptmediatoren unseres Immungedächtnisses.
Das Verständnis ihrer Physiologie bildet die Grundlage zahlreicher
medizinischer Interventionen, sowohl prophylaktisch, in Form iatrogener
Immunität durch Impfungen, als auch therapeutisch, in Form von
Immunmodulationen. Über die organspezifischen Nischen sowie das Wissen um
deren potentiellen Eigenschaften für das Überleben und die Reifung dieser
Zellen ist jedoch weder für die gesunden Verhältnisse noch für die
Autoimmunität hinreichend aufgeklärt. Die Mehrzahl histologischer Studien in
humanen lymphatischen Geweben basiert auf konventionell lichtmikroskopisch
untersuchten Paraffinpräparaten. Der erste Teil der vorliegenden Arbeit
widmete sich daher, zur methodischen Erweiterung und Verbesserung der
bisherigen Untersuchungen, der Etablierung immunhistochemischer
Multifluoreszenzfärbungen auf Gefrierschnitten humaner Milzen und Tonsillae
palatinae für die Analyse mittels konfokalem Laser-Scanning-Mikroskop. Dies
gelang unter der parallelen Verwendung mehrerer durchflusszytometrisch
genutzter Mausantikörper unter Benutzung von Haptensystemen, wodurch die
Spezieslimitation in der Detektion umgangen wird und zusätzlich eine direkte
Visualisierungsoption durchflusszytometrisch erhobener Daten besteht. Unter
Anwendung dieser etablierten Methode war es durch die separate digitale
Information von fünf Fluoreszenzsignalen eines einzelnen Gewebeschnittes
erstmals möglich, die histologische Verteilung tonsillärer CD27+CD20+Ki67-
Gedächtnis-B-Zellen im Kontext ihres Mikroenviroment zu beschreiben. In den
anschließenden vergleichenden histologischen Analysen zwischen Milzen und
Tonsillae palatinae konnte als Gemeinsamkeit die dominierende
Gedächtnis-B-Zellakkumulation, als unklar begrenztes follikelassoziiertes
Areal mit heterogener Zusammensetzung ihrer Immunglobulin-Isotypen,
herausgestellt werden. Die vorliegenden Ergebnisse unterstützen dabei den
kürzlich durch Steiniger1 publizierten Vorschlag der Bezeichnung der humanen
marginalen Zone der Milz als ‚superfizielle Zone‘, um von der Marginalzone der
Nagetiere abzugrenzen und sprechen darüber hinaus für die Verwendung dieses
Terms ebenso für weitere humane sekundäre lymphatische Organe. Für künftige
Versuchstierstudien bedeutet dies, neben den vielen Vorteilen, kritischer mit
terminologischen Gleichsetzungen umzugehen. Bezüglich der nachgewiesenen
Unterschiede in der Immunglobulin-Subklassendominanz und der Ausprägung der
Gedächtnis-B-Zellareale bleibt allgemein zu klären, welche Bedeutung dabei dem
Anteil unterschiedlicher Adhärenzmoleküle zukommt und vor allem wie der
immunologische mit dem follikulären Status in Organismen langfristig zusammen
hängen.
de
dc.description.abstract
Memory B cells are major mediators of our immunological memory. The
understanding of their physiology is the basis for numerous medical
interventions like prophylaxes by iatrogenic immunity through vaccine as well
as therapy by immune modulation. However, the organ-specific niches and the
knowledge about their potential features for the survival and maturation of
these cells have not been sufficiently clarified yet, neither for healthiness
nor for autoimmunity. The majority of histological studies within human
lymphatic tissues are based on paraffin sections which are examined by
conventional light microscopy. To methodological extend and improve these
existing investigations, in the first part of this study immunohistochemical
multicolor stainings with frozen sections from human spleens and palatine
tonsils were established and analyzed with confocal microscopy. This succeeded
through the simultaneous usage of several mouse antibodies, also used in flow
cytometry, in combination with hapten systems, whereby the species limitation
in detection is circumvented and in addition a direct option to visualize flow
cytometric analyses is gained. The application of this established method
allowed the separate, digital information of five fluorescence signals within
a single tissue section and therefore the initial histological localization of
tonsillar CD27+CD20+Ki67- memory B cells in the context of their
microenvironment. In the subsequent comparative studies it was found, that the
commonality between the histological memory B cell localization in human
spleens and palatine tonsils is the general accumulation of these cells
directly around the follicular mantle in form of an unclear limited follicle
associated area with a heterogeneous composition of their immunoglobulin
isotypes. The present results support the recently published proposal by
Steiniger1 to rename the human splenic marginal zone to ‚superficial zone‘ to
distinguish it from the differing rodent spleen and, moreover, to use this
term equally for other secondary lymphoid organs. Besides many benefits, this
emphasizes for future animal studies, to be more careful with terminological
equations. Regarding the observed differences in the form of the memory B cell
areas including the proportion of their immunoglobulin isotype distribution,
the significance of various adherence molecules remains to be explored and
efforts should be undertaken to inform about the long term interrelationships
between the immunological and the follicular status in organisms.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
memory B cells
dc.subject
LSM multicolor stainings
dc.subject
lymphatic tissues
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Etablierung immunhistochemischer Multifluoreszenzfärbungen für Gedächtnis-B
-Zell-Lokalisationsstudien in humanen lymphatischen Geweben
dc.contributor.firstReferee
N.N.
dc.contributor.furtherReferee
N.N.
dc.date.accepted
2017-06-25
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000104730-5
dc.title.translated
Establishment of immunohistochemical multicolor stainings for memory B cell
localization studies within human lymphatic tissues
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000104730
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000021516
dcterms.accessRights.dnb
free
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open access