Gedächtnis-B-Zellen zählen zu den Hauptmediatoren unseres Immungedächtnisses. Das Verständnis ihrer Physiologie bildet die Grundlage zahlreicher medizinischer Interventionen, sowohl prophylaktisch, in Form iatrogener Immunität durch Impfungen, als auch therapeutisch, in Form von Immunmodulationen. Über die organspezifischen Nischen sowie das Wissen um deren potentiellen Eigenschaften für das Überleben und die Reifung dieser Zellen ist jedoch weder für die gesunden Verhältnisse noch für die Autoimmunität hinreichend aufgeklärt. Die Mehrzahl histologischer Studien in humanen lymphatischen Geweben basiert auf konventionell lichtmikroskopisch untersuchten Paraffinpräparaten. Der erste Teil der vorliegenden Arbeit widmete sich daher, zur methodischen Erweiterung und Verbesserung der bisherigen Untersuchungen, der Etablierung immunhistochemischer Multifluoreszenzfärbungen auf Gefrierschnitten humaner Milzen und Tonsillae palatinae für die Analyse mittels konfokalem Laser-Scanning-Mikroskop. Dies gelang unter der parallelen Verwendung mehrerer durchflusszytometrisch genutzter Mausantikörper unter Benutzung von Haptensystemen, wodurch die Spezieslimitation in der Detektion umgangen wird und zusätzlich eine direkte Visualisierungsoption durchflusszytometrisch erhobener Daten besteht. Unter Anwendung dieser etablierten Methode war es durch die separate digitale Information von fünf Fluoreszenzsignalen eines einzelnen Gewebeschnittes erstmals möglich, die histologische Verteilung tonsillärer CD27+CD20+Ki67- Gedächtnis-B-Zellen im Kontext ihres Mikroenviroment zu beschreiben. In den anschließenden vergleichenden histologischen Analysen zwischen Milzen und Tonsillae palatinae konnte als Gemeinsamkeit die dominierende Gedächtnis-B-Zellakkumulation, als unklar begrenztes follikelassoziiertes Areal mit heterogener Zusammensetzung ihrer Immunglobulin-Isotypen, herausgestellt werden. Die vorliegenden Ergebnisse unterstützen dabei den kürzlich durch Steiniger1 publizierten Vorschlag der Bezeichnung der humanen marginalen Zone der Milz als ‚superfizielle Zone‘, um von der Marginalzone der Nagetiere abzugrenzen und sprechen darüber hinaus für die Verwendung dieses Terms ebenso für weitere humane sekundäre lymphatische Organe. Für künftige Versuchstierstudien bedeutet dies, neben den vielen Vorteilen, kritischer mit terminologischen Gleichsetzungen umzugehen. Bezüglich der nachgewiesenen Unterschiede in der Immunglobulin-Subklassendominanz und der Ausprägung der Gedächtnis-B-Zellareale bleibt allgemein zu klären, welche Bedeutung dabei dem Anteil unterschiedlicher Adhärenzmoleküle zukommt und vor allem wie der immunologische mit dem follikulären Status in Organismen langfristig zusammen hängen.
Memory B cells are major mediators of our immunological memory. The understanding of their physiology is the basis for numerous medical interventions like prophylaxes by iatrogenic immunity through vaccine as well as therapy by immune modulation. However, the organ-specific niches and the knowledge about their potential features for the survival and maturation of these cells have not been sufficiently clarified yet, neither for healthiness nor for autoimmunity. The majority of histological studies within human lymphatic tissues are based on paraffin sections which are examined by conventional light microscopy. To methodological extend and improve these existing investigations, in the first part of this study immunohistochemical multicolor stainings with frozen sections from human spleens and palatine tonsils were established and analyzed with confocal microscopy. This succeeded through the simultaneous usage of several mouse antibodies, also used in flow cytometry, in combination with hapten systems, whereby the species limitation in detection is circumvented and in addition a direct option to visualize flow cytometric analyses is gained. The application of this established method allowed the separate, digital information of five fluorescence signals within a single tissue section and therefore the initial histological localization of tonsillar CD27+CD20+Ki67- memory B cells in the context of their microenvironment. In the subsequent comparative studies it was found, that the commonality between the histological memory B cell localization in human spleens and palatine tonsils is the general accumulation of these cells directly around the follicular mantle in form of an unclear limited follicle associated area with a heterogeneous composition of their immunoglobulin isotypes. The present results support the recently published proposal by Steiniger1 to rename the human splenic marginal zone to ‚superficial zone‘ to distinguish it from the differing rodent spleen and, moreover, to use this term equally for other secondary lymphoid organs. Besides many benefits, this emphasizes for future animal studies, to be more careful with terminological equations. Regarding the observed differences in the form of the memory B cell areas including the proportion of their immunoglobulin isotype distribution, the significance of various adherence molecules remains to be explored and efforts should be undertaken to inform about the long term interrelationships between the immunological and the follicular status in organisms.
