Hornhauttransplantationen (syn. Keratoplastiken) sind eine der erfolgreichsten und am häufigsten durchgeführten Transplantationen weltweit. Das Risiko, eine postoperative Endophthalmitis oder infektiöse Keratitis über eine mikrobiologisch kontaminierte Spenderhornhaut zu erwerben, ist gering. Erfolgt dennoch eine Kontamination, kann dies im schlimmsten Fall zur Erblindung bis hin zum Verlust des Auges führen. Um ein hohes Maß an Sicherheit zu gewährleisten, muss das Augenhornhauttransplantat mit einer validierten Methode auf mögliche Kontamination vor der Transplantation überprüft werden. Die aktuell als Goldstandard verwendete Testmethode, das antibiotikahaltige Hornhautkulturmedium mittels Blutkulturautomaten und resinhaltigen Blutkulturflaschen zu untersuchen, wurde ursprünglich vom Hersteller speziell für die Testung von Patientenblutproben, welche relativ geringe Konzentrationen an Antibiotika enthalten, entwickelt und validiert. Wird jedoch ein Hornhautkulturmedium mit einer höheren Antibiotikakonzentration untersucht, kann es zu falsch-negativen Ergebnissen kommen, da die Antibiotikaelimination unvollständig ist. In der vorliegenden experimentellen Studie wird ein neuer innovativer Ansatz zur Eliminierung von Antibiotika aus Proben für mikrobiologische Tests mittels RESEP (AL.CHI.MI.ASrl, Ponte San Nicolò – Padova, Italien) untersucht. RESEP ist ein patentiertes, CE-zertifiziertes In-vitro-Diagnostikum, das eine Kombination aus Harzen (Resine) in Form von Kügelchen enthält, die dafür geeignet sind, verschiedene Antibiotika zeitgleich aus flüssigen Proben zu adsorbieren, ohne die potenziell darin enthaltenen Bakterien zu entfernen. Die experimentelle Studie verwendet dafür den im Europäischen Arzneibuch (Ph. Eur.), Kapitel 2.6.1, beschriebenen Eignungstest sowie die Methodenvalidierung in Ph. Eur., Kapitel 2.6.27. Für die experimentelle Studie wurden 10 bis 100 koloniebildende Einheiten von Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Aspergillus brasiliensis und Clostridium sporogenes, Staphylococcus epidermidis und Enterobacter cloacae in 9 ml Hornhaut-kulturmedium inokuliert. Die Studie wurde in zwei Gruppen eingeteilt. In Gruppe A wurde das inokulierte Hornhautkulturmedium für 20 min mit RESEP bei Raumtemperatur durch rotierende Bewegung durchmischt und anschließend in die BD BACTECTM-Plus-aerob/F- und BD BACTECTM-Plus-anaerob/F-Blutkulturflaschen beimpft. In Gruppe B wurde das inokulierte Hornhautmedium direkt in die BACTECTM-Blutkulturflaschen injiziert. Für jeden Stamm wurde eine Positivkontrolle durch direkte Inokulation der Mikroorganismen in BACTECTM-Blutkulturflaschen vorgenommen. Alle Proben wurden im automatisierten BD BACTECTM-FX-Blutkulturautomaten bei 36 °C ± 1 °C für maximal 14 Tage inkubiert. Die benötigte Zeit für die Entfernung von Antibiotika aus dem Medium durch RESEP wurde mittels Ultra-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (UHPLC) bestimmt. Nach 20-minütiger RESEP-Behandlung wurden in Gruppe A alle Mikroorganismen innerhalb von 3 Tagen nach Inkubation mit einer Empfindlichkeit von 100 % (n = 99) nachgewiesen. In Gruppe B betrug die Gesamtsensitivität nur 67,9 % (n = 96). Mit der vorliegenden Arbeit wurde die Eliminierung der Antibiotika aus dem Hornhautkulturmedium unter Verwendung von RESEP gemäß dem Europäischen Arzneibuch erfolgreich validiert. Durch die Nutzung des RESEP-Systems in der Routine können antibiotikabedingte falsch-negative Ergebnisse weitestgehend ausgeschlossen und das Risiko einer über die Spenderhornhaut erworbenen Endophthalmitis oder Keratitis auf ein Minimum reduziert werden.
Corneal transplants (syn. Keratoplasty) are one of the most successful and most frequently per-formed transplants worldwide. The risk of contracting postoperative endophthalmitis or an infectious keratitis through a microbiologically contaminated donor cornea is low. If contamination occurs nevertheless, it can lead to blindness or even loss of the eye in the most severe case. To ensure a high level of safety, the corneal transplant must be examined for possible contamination by using a validated test method. The test method currently used as the gold standard for examining the corneal organ culture medium containing antibiotics, using automatic blood culture and resin-containing blood culture bottles, was originally developed and validated by the manufacturer especially for testing patient blood samples which contain relatively low concentrations of antibiotics. However, if a corneal culture medium with a higher antibiotic concentration is examined, false-negative results can occur caused by incomplete antibiotic elimination. In the following experimental study, an innovative approach to eliminate antibiotics from samples for microbiological tests using RESEP (AL.CHI.MI.ASrl, Ponte San Nicolò – Padova, Italy) is under review. RESEP is a patented, CE-certified in vitro diagnostic medical device that contains a combination of resins in the form of beads, which are suitable for simultaneously adsorbing different antibiotics from liquid samples without the risk of removing potentially contained bacteria. The experimental study uses the aptitude test in accordance with European Pharmacopoeia (Ph. Eur.), chapter 2.6.1, as well as method validation in accordance with Ph. Eur., chapter 2.6.27. For the experimental study 10–100 colony-forming units of Staphylococcus aureus (SA), Bacillus subtilis (BS), Pseudomonas aeruginosa (PA), Candida albicans (CA), Aspergillus brasiliensis (AB) and Clostridium sporogenes (CS), Staphylococcus epidermidis (SE) and Enterobacter cloacae (EC) were inoculated in 9 ml corneal culture medium. The study was divided in two groups. In group A the inoculated corneal culture medium was treated for 20 minutes with RESEP at room temperature and then injected into the BD BACTECTM Plus aerobic / F and BD BACTECTM Plus anaerobic / F blood culture bottles. In group B, the inoculated corneal medium was injected directly into the BAC-TEC™ blood culture bottles. A positive control was carried out for each strain by direct inoculation of the microorganisms in BD BACTEC™ blood culture bottles. All samples were incubated in automated BD BACTECTM FX blood culture machines at 36 °C ± 1 °C for a maximum of 14 days. The removal of antibiotics from the medium by RESEP was carried out using ultra-high-performance liquid chromatography (UHPLC). Following the 20-minute-RESEP treatment, all microorganisms in group A were identified with a sensitivity of 100 % (n = 99) within 3 days after incubation. In group B the overall sensitivity was 67.9 % (n = 96). In the present work the elimination of the antibiotics from the corneal culture medium by use of RESEP was successfully validated according to the European Pharmacopoeia. The RESEP system therefore provides a new standard procedure to avoid antibiotic-related, false negative results. The risk of contracting endophthalmitis or keratitis, contracted via the donor cornea, can be reduced to a minimum.
