Hintergrund: Ungenügende Immunregulation durch CD4+CD25+ Forkhead Box (FOX)P3+ regulatorische T Zellen (Treg) kann Morbus Crohn verursachen. Treg wurden zunächst phänotypisch charakterisiert. Durch die Bildung von transformierten Wachstumsfaktor (TGF)β; -induzierten Treg (TiTreg) kann FOXP3 in T Zellen in vitro induziert werden. Welche Vorläufer-T-Zell-Subpopulation entweder naiv (CD4+CD25-CD45RA+) oder Effektor-T-Zellen (CD4+CD25-) erzeugt TiTreg mit regulatorischer Funktion?
Methoden: Mit durchflusszytometrischen Analysen wurde die Expression von CD127, CD49d und CD45RA untersucht. Naive und Effektor-T-Zellen, die aus peripheren mononukleären Blutzellen durch magnetische Zellsortierung isoliert wurden, wurden in vitro mit anti-CD3/CD28 und in Gegenwart von TGFβ; und Interleukin(IL) 2 behandelt. Die suppressive Kapazität wurde mit einer gemischte Lymphozytenreaktionen untersucht.
Ergebnisse: Patienten mit Morbus Crohn hatten signifikant mehr CD4+ CD25+ CD127- T Zellen, unabhängig von der Behanldung mit Infliximab oder der Krankheitsaktivität. Patienten mit Morbus Crohn wiesen signifikant mehr aktivierte Treg und gleich viele ruhende Treg als Gesunde. Naive und Effektor T Zellen ergeben ca. 60% -80% CD4+CD25+FOXP3+ T Zellen. Nur FOXP3+ T Zellen (TiTreg), die aus naiven CD4+ T-Zellen umgewandelt wurden, entwickeln suppressive Eigenschaften und exprimieren CCR4, beta7.
Schlussfolgerungen: Die Bildung von TiTreg aus naiven T-Zellen von Patienten ist möglich. Diese Zellen exprimieren Homing-Marker für eine mögliche Migration zu der Entzündung.
Background: Deficient immunoregulation through CD4+CD25+ Forkhead-box protein(FOX)P3+ regulatory T-cells (Treg) can cause Crohn´s disease. Therefore, Treg were phenotypically characterized. Establishing transforming growth factor (TGF)β induced Treg (TiTreg), effector T-cells can acquire FOXP3 expression in the presence of cytokine in vitro. Which progenitor T-cell subpopulation either naive or effector T-cells will generate TiTreg with regulatory function? Methods: Using flow cytometric analysis, the expression of CD127, CD49d and CD45RA were investigated. Naive and effector T-cells isolated from peripheral blood mononuclear cells via magnetic cell sorting were treated with anti-CD3/CD28 and in the presence of TGFβ and interleukin(IL)-2 in vitro. Suppressive capacity was assessed by mixed lymphocyte reactions. Results: Patients with Crohn's disease had significantly more CD4+CD25+CD127- T-cells than healthy donors, independent of treatment with infliximab or disease activity. Patients with Crohn's disease had significantly more activated Treg and equal resting Treg in comparison to healthy donors. Naive and effector T-cells give rise to approx. 60% -80% CD4+CD25+FOXP3+ T-cells from both, healthy donors and patients with CD. Only FOXP3+ T-cells TiTreg converted from naive CD4+ T-cells suppressed mixed lymphocyte reactions and express CCR4, beta7. Conclusions: The generation of TiTreg from naive T cells from patients was at least equally effective as from healthy donors. These cells express homing markers for potential migration to the inflammation.
