Einleitung: Die mikrobiologische Sepsisdiagnostik ist essenziell für eine adäquate Antibiotikatherapie und dient der Vermeidung von Resistenzentwicklungen. Mit konventionellen Verfahren ist in der Regel frühestens 48 h nach positivem Signal des Blutkulturflaschensystems ein vollständiges Ergebnis der Identifizierung und der Empfindlichkeitsprüfung des Isolates zu erwarten. Ziel dieser Studie war deshalb die Beschleunigung der Erregerbestimmung und der Antibiogrammerstellung aus positiven Blutkulturflaschen ohne Subkultivierung. Methodik: Es wurde eine Präparation von Bakterienlysaten aus positiven Blutkulturflaschen mittels MALDI Sepsityper® Kit und eine schnelle Identifizierung des Keimes durch Analyse charakteristischer bakterieller Moleküle mittels MALDI-TOF Massenspektrometrie (MS) (Bruker microflex™ LT/Biotyper™-Software) durchgeführt. Als Referenzmethode diente die Identifizierung der Mikroorganismen mittels MALDI-TOF MS nach vorangegangener Subkultivierung. Zur Resistenztestung wurden BD Phoenix™ Panels direkt aus resuspendierten Bakterien-Pellets inokuliert. Diese Ergebnisse der direkten Resistenzbestimmung sind mit den Resultaten der Routinediagnostik von der Subkultur im VITEK® 2 System verglichen worden. Die mittels MALDI-TOF MS als Staphylococcus aureus identifizierten Bakterien wurden mit einer real-time PCR (BD GeneOhm™ StaphSR Test) direkt auf MRSA untersucht. Ergebnisse: Es sind 1 033 Isolate aus positiven Blutkulturflaschen untersucht worden. Die erfolgreiche Erregeridentifizierung der untersuchten Mikroorganismen direkt aus Blutkulturflaschen gelang bei 61,8% mit einem Probenvolumen von 1 000 µl und bei 75,4% mit einem Probenvolumen von 200 µl. Alle 13 MRSA aus Einzelinfektionen wurden mit der real-time PCR innerhalb von 90 min identifiziert. Die Antibiogrammerstellung ohne Subkultivierung mit dem BD Phoenix™ System wurde anhand von 3 337 Bakterien-Antibiotika-Kombinationen nach EUCAST-Kriterien untersucht. Die Übereinstimmung mit der Referenzmethode betrug 92,3%. Es traten 4,2% minor errors, 1% major errors und 2,5% very major errors auf. Die Dauer der Resistenzbestimmung relevanter Antibiotika betrug im Mittel für Enterokokken 7 bis 8,7 h, für koagulasenegative Staphylokokken 10,7 bis 13,6 h, für S. aureus 7,7 bis 8,9 h, für Enterobakteriazeen 6,4 bis 6,9 h und für Nonfermenter 11,7 bis 12,6 h. Schlussfolgerung: Die direkte Identifizierung von Mikroorganismen mittels MALDI-TOF MS in Kombination mit der direkten Antibiogrammerstellung mit dem BD Phoenix™ System aus positiven Blutkulturflaschen und einem MRSA-Nachweis durch PCR ermöglicht einen Zeitgewinn von mindestens 24 h gegenüber der konventionellen mikrobiologischen Diagnostik.
Introduction: In septicaemia, microbiological diagnostics of sepsis is essential for adequate antibiotic treatment and should limit the selection of resistant strains. Using conventional techniques, the final results of identification and antimicrobial susceptibility testing are to be expected not earlier than 48 h after detection of the positive blood culture bottles. The aim of this study was to accelerate both the identification of the pathogen and antimicrobial susceptibility testing from positive blood culture bottles without subculture. Methods: A preparation of bacterial lysates from positive blood culture bottles using MALDI Sepsityper® Kit and a fast identification of the pathogen was performed by analysing characteristic bacterial molecules using MALDI-TOF mass spectrometry (MS) (Bruker microflex™ LT/Biotyper™ software). The reference method included the identification of microorganisms using MALDI-TOF MS after previous culturing. For direct antimicrobial susceptibility testing, BD Phoenix™ panels were inoculated directly from resuspended bacterial pellets. These results from direct testing of antimicrobial susceptibilities were compared with the results of routine diagnostics from subcultures using the VITEK® 2 system. In addition, the microorganisms identified by MALDI-TOF MS as Staphylococcus aureus were tested directly for MRSA using a real-time PCR (BD GeneOhm™ StaphSR test). Results: 1 033 clinical samples from positive blood culture fluids were analysed. Direct identification of all tested microorganisms from blood cultures was successful in 61.8% using 1 000 μl of sample volume and in 75.4% using 200 μl of sample volume. All 13 MRSA from monomicrobial positive blood cultures were correctly identified by real-time PCR within 90 min. Antimicrobial susceptibility testing without subcultivation using the BD Phoenix™ system was evaluated by testing 3 337 bacteria-antibiotic-combinations according to EUCAST criteria. A 92.3% category agreement with the reference method was obtained with 4.2% minor errors, 1% major errors and 2.5% very major errors. The average time of antimicrobial susceptibility testing for relevant antibiotics was 7 to 8.7 h for enterococci, 10.7 to 13.6 h for coagulase-negative staphylococci, 7.7 to 8.9 h for S. aureus, 6.4 to 6.9 h for enterobacteriaceae and 11.7 to 12.6 h for nonfermenting bacteria. Conclusion: The rapid identification of microorganisms from positive blood cultures using MALDI-TOF MS in combination with direct antimicrobial susceptibility testing from blood culture fluids using the BD Phoenix™ system and a MRSA detection by real-time PCR resulted in an acceleration of at least 24 h compared to conventional microbiological techniques.
