dc.contributor.author
Döbler, Oliver
dc.date.accessioned
2018-06-08T01:02:36Z
dc.date.available
2011-07-21T09:47:10.761Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/12863
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-17061
dc.description.abstract
Einleitung: Das kolorektale Karzinom ist einer der häufigsten malignen Tumore
und in Deutschland die zweithäufigste Krebstodesursache. Ein wesentlicher
Faktor in der Progression maligner Neoplasien ist die Versorgung mit
Sauerstoff und Nährstoffen durch Anschluss an das körpereigene Gefäßsystem.
Die Aktivierung der Angiogenese durch Umschalten des „angiogenetischen
Switches“ wird durch verschiedene Signaltransduktionswege gesteuert.
Monoklonale Antikörper gegen pro-angiogenetische Faktoren werden in der
Therapie des kolorektalen Karzinoms bereits eingesetzt. Das System der Robo-
Rezeptoren und ihrer Slit-Liganden ist an Angiogenese- Mechanismen beteiligt
und konnte als differentiell exprimiert in verschiedenen Tumorgeweben
nachgewiesen werden. In Untersuchungen der eigenen Arbeitsgruppe konnten
mittels DNA- Chiparray Analyse Robo1, Robo4 und Slit2 als differentiell
exprimiert beim kolorektalen Karzi- nom nachgewiesen werden. Ziel dieser
Studie war die Validierung der differentiellen Expression mittels Real-Time
Fluores- zenz PCR und Analyse der Expression von Robo1, Robo4 und Slit2 in
situ im Gewebe sowie die Bewertung eines potentiellen Ziels einer
antiproliferativen bzw. anti-angiogenetischen Tumortherapie. Material und
Methoden: Von 50 Patienten wurden postoperativ Proben von kolorektalem Tumor-
und Normalgewebe kryoasserviert und makrodisseziert. Nach RNA-Isolierung und
reverser Transkription wurde die quantitative Analyse der Genexpression von
Robo1, Robo4 und Slit2 mittels Real-time PCR durchgeführt. Hierzu wurden
spezifische Hybridisierungssonden eingesetzt, wobei als Referenz- gen
β-2-Mikroglobulin verwendet wurde. Die Expressionsdaten wurden mit dem
Algorithmus der Relative Quantification Software ausgewertet. Für den
histologischen Nachweis auf Paraffin- Gewebeschnitten wurden die Methoden der
Immunhistochemie (IHC) bzw. In-Situ Hybridisie- rung (ISH) herangezogen. Die
IHC und ISH wurde mittels einer Intensitätsskala bewertet. Dabei entsprach der
Wert (+++) einer starken Anfärbung, der Wert (++) einer moderaten Anfärbung,
der Wert (+) einer geringen Anfärbung und der Wert (+/-) einer nicht
eindeutigen Färbung. Die Methoden der Real-Time PCR und der IHC wurden mittels
der Spearman-Korrelationsanalyse auf Vergleichbarkeit geprüft. Dazu wurde die
IHC Anfärbungsskala in einen Rangfolgenscore transformiert mit den
Zahlenwerten 3 (+++), 2 (++), 1 (+) und 0,5 (+/-). Ergebnisse: Robo1 zeigte in
der Real-Time PCR eine signifikante Überexpression bei 78% (39/50) der Pati-
enten im Tumorepithel gegenüber dem Normalepithel. Robo4 ließ sich in 72%
(36/50) der Patentenproben als überexprimiert im Tumorepithel nachweisen. In
68% (34/50) der Patientenprobenpaare war Slit2 im Tumorgewebe niedriger
exprimiert als im Normalgewebe. Ein signifikanter Unterschied zwischen den
einzelnen UICC-Stadien und insbesondere zwischen den metasta- tischen Stadien
UICC III/IV und den nicht metastatischen Stadien UICC I/II ließ sich weder für
Robo1, Robo4 noch Slit2 ermitteln. Die IHC zeigte für Robo1 eine starke
Expression in Tumorepithelzellen und Tumorgefäßen, wohingegen das Normalgewebe
nur schwach angefärbt wurde. In der ISH ließ sich Robo1 sowohl in Tumorzellen
als auch in den angrenzenden Gefäßstrukturen nachweisen. Robo4 zeigte in der
Immunhistochemie und In-Situ Hybridisierung ausschließlich eine Anfärbung der
Tumorendothelien. Slit2 zeigte immunhistochemisch kein spezifisches
Färbungsmuster. Eine stärkere Anfärbung von Tumor- oder Normalgewebe ließ sich
nicht ermitteln. Die Korrelationsanalyse ergab für die Real-Time PCR und IHC
für Robo1 einen schwachen signifikanten Zusammenhang, für Robo4 einen
schwachen signifikanten Zusammenhang und für Slit2 keinen signifikanten
Zusammenhang. Schlussfolgerung: Die Überexpression von Robo1 und Robo4 im
Tumor gegenüber Normalgewebe konnte mittels Real-Time PCR bestätigt werden.
Robo1 und Robo4 sind damit als Tumoronkogene beim kolorektalen Karzinom
anzusehen. Slit 2 zeigt eine herunter regulierte Expression im Tumorgewebe und
damit das RNA-Expressionsmuster eines Tumorsuppressorgens jedoch ohne
Bestätigung durch IHC. Robo1 zeigt in der IHC keine spezifische
Gewebeanfärbung jedoch eine deutlich höhere Färbungsintensität im Tumorgewebe.
Diese Tatsache bietet Potential für weitere Untersuchungen im Hinblick auf die
Tumorbiologie des kolorektalen Karzinoms und Möglichkeiten der therapeutischen
Intervention. Die histologischen Gewebeanalysen haben insbesondere für Robo4
eine spezifische Expression in den Tumorgefäßen gezeigt. Robo4 stellt durch
seine Gewebespezifität und einer direkten Beteiligung an der Angiogenese ein
potentielles Ziel einer antiproliferativen bzw. anti-angiogenetischen
Tumortherapie beim kolorektalen Karzinom dar.
de
dc.description.abstract
Introduction: Colorectal cancer is one of the most common malignant tumors and
in Germany the second most common cause of cancer death. A key factor in the
progression of malignant neoplasms is the supply of oxygen and nutrients by
connecting to the body's vascular system. The activation of angiogenesis by
toggling the "angiogenic switch"is controlled by different signal transduction
pathways. Monoclonal antibodies against pro-angiogenic factors are used
already in the treatment of colorectal cancer. The system of Robo-Slit
receptors and their ligands is involved in angiogenesis mechanisms and could
be detected as differentially expressed in various tumor tissues. In previous
studies of the working group Robo1, Robo4 and Slit2 were detected as
differentially expressed in colorectal cancer by DNA chip array analysis . The
aim of this study was to validate the differential expression by real-time
fluorescence PCR and analysis of the expression of Robo1, Robo4 Slit2 in the
tissue and the evaluation of a potential target of anti-proliferative and
anti-angiogenic tumor therapy. Material and methods: Postoperatively samples
of colorectal tumor and normal tissue of 50 patients were kryoasserved and
makrodissected. After RNA isolation and reverse transcription quantitative
analysis of gene expression of Robo1, Robo4 and Slit2 by real-time PCR was
performed. For this purpose, specific hybridization probes were used. β-2
microglobulin was used as the reference gene. The expression data were
analyzed using the algorithm of the Relative Quantification Software. For the
histological detection on paraffin tissue sections, the methods of
immunohistochemistry (IHC) and in situ hybridization (ISH) were used. The IHC
and ISH were estimated using an intensity scale. In this case, the value of a
strong (+++) staining, the value (+ +) moderate staining, the value (+)
staining and a low value (+/-) of a non-unique coloring. The methods of the
Real-Time PCR and IHC were tested by the Spearman correlation analysis for
correlation. Therefore the IHC scale was transformed into a ranking score with
the numerical values 3 (+++), 2 (++), 1 (+) and 0.5 (+/-). Results: Robo1
showed in real-time PCR, a significant over-expression in 78% (39/50) of the
patients in tumorepithel against the normal-tissue. Robo4 could be detected as
overexpressed in 72% (36/50) of the patient tumor tissue. In 68% (34/50) of
patients samples Slit2 was expressed lower in tumor tissue than in normal
tissue. A significant difference between the UICC stages and in particular
between the metastatic UICC stages III / IV and non-metastatic stages UICC I /
II was determined neither for Robo1, Robo4 Slit2 yet. The IHC showed a strong
expression of Robo1 in tumor cells and tumor vessels, whereas the normal
tissue was stained only weakly. In the ISH Robo1 was detected in tumor cells
and in the adjacent vascular structures. Robo4 showed in immunohistochemistry
and in situ hybridization exclusive staining of the tumor vascular structures.
Slit2 immunohistochemistry showed no specific staining pattern. A stronger
staining of tumor or normal tissue could not be ascertained. The correlation
analysis showed for the Real-Time PCR and IHC for Robo1 a weak significant
association, for Robo4 a weak significant connection and for Slit2 no
significant relationship. Conclusion: The overexpression of Robo1 and Robo4 in
the tumor compared with normal tissue was confirmed by real-time PCR. Robo1
and Robo4 are to be regarded as tumoroncogenes in colorectal carcinoma. Slit 2
showed a down-regulated expression in the tumor tissue and thus the RNA
expression pattern of a tumor suppressor gene, however, without confirmation
by IHC. Robo1 in the IHC shows no specific tissue staining however, a
significantly higher staining intensity in tumor tissue. This fact offers
potential for further investigations in view of the tumor biology of
colorectal cancer and possibilities of therapeutic intervention. The
histological tissue studies have shown particular Robo4 specific expression in
the tumor vessels. Robo4 is a potential target of anti-proliferative and anti-
angiogenic tumor therapy in colorectal cancer, through its tissue specificity
and a direct involvement in angiogenesis
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
colorectal cancer
dc.subject
roundabout proteins
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Genexpressionsanalyse der angiogenetischen Marker Robo1, Robo4 und Slit2 beim
kolorektalen Karzinom
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. med. H.-J. Buhr
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. med. H. Allgayer
dc.contributor.furtherReferee
Priv.-Doz. Dr. C. Pilarsky
dc.date.accepted
2011-09-09
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000022886-4
dc.title.translated
Gene expression analysis of angiogenic markers Robo1, Robo4 and the Slit2 in
colorectal cancer
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000022886
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000009488
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access