dc.contributor.author
Said, Abdelrahman
dc.date.accessioned
2018-06-08T00:25:47Z
dc.date.available
2016-06-17T08:45:23.052Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/11911
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-16109
dc.description.abstract
Equine herpesvirus type 1 (EHV-1) is an important pathogen that threatens
horse populations worldwide and causes spacious economic losses through
recurrent outbreaks of respiratory, abortion and neurological disease. Primary
infections with EHV-1 lead to the establishment of latent infection within the
first weeks of life. The two main strategies for controlling EHV-1 infection
and disease are strict hygiene and management practices as well as
vaccination. Several vaccines exist to prevent the most severe outcomes of
EHV-1 infection, but they are insufficient for long-term protection.
Therefore, considerable efforts have been developed to understand the
replication and growth properties of EHV-1 and the function of its gene
products in order to generate information that may be useful in the design of
an effective vaccine. Since the functions of the EHV-1 ORF34 and ORF59 protein
(pORF34 and pORF59) products are unknown, the overall targets of this thesis
are to (i) identify and characterize the EHV-1 pORF34 and pORF59 products and
(ii) examine whether they have a role in pathogenesis of EHV-1. In Chapter 2
of this thesis, we focused on the identification of ORF34 product that is
expressed with early kinetics and its product is localized within the cytosol
of EHV-1- infected cells. Immunoblot analysis of EHV-1 pORF34 detected a
protein with the apparent molecular mass of 28-kDa, which is larger than that
predicted based on the sequence of the protein (18-kDa). Interestingly, the
kinetics of pORF34 expression had shown protein stability until 10 h p.i.,
however, additional bands with apparent molecular masses ranging between 17-
and 28-kDa appeared at later times after infection. Our findings suggested
that stability of pORF34 is dependent on the time after infection and that
pORF34 may only be required at early times after infection or that its
function at later times after infection requires the protein be modified by
ubiquitin/proteasome pathway. Furthermore, examination of the replication
properties of an EHV-1 lacking ORF34 (rAb4Δ34) revealed that pORF34 is
required for efficient virus growth in vitro at early stages of infection. In
Chapter 3 of this thesis, we addressed more details about the identification
of EHV-1 pORF59 and its role in the EHV-1 pathogenesis. We found that pORF59
is expressed at the early stage of infection and its product is localized in
the cytosol of the infected cells. Immunoblot analysis of EHV-1 pORF59,
including the inserted epitope, detected a protein with a molecular mass of
approximately 21-kDa, which is similar to the predicted sequence of the
protein. Moreover, EHV-1 lacking ORF59 (rAb4Δ59) exhibited a small-plaque
phenotype and could not be propagated even after serial passages in cell
culture. Our findings suggest that the ORF59 protein plays a major role in
EHV-1 growth in cultured cells. Generally, a concise list below can show the
highlights points of this thesis: \- The EHV-1 ORF34 protein is expressed at
early stage of infection and its product is localized in cytosol of EHV-1
infected cells. \- The ORF34 protein is modified by ubiquitination and
degraded in the proteasome at late times of infection \- The ORF34 protein is
required for optimal replication of EHV-1 in cultured cells and target cells
taken directly ex vivo at early times of infection. \- The EHV-1 ORF59 protein
is a 21-kDa protein expressed with early kinetics. \- The product of the EHV-1
ORF59 protein localizes to cytosol of EHV-1-infected cells. \- The EHV-1 ORF59
protein is essential for EHV-1 growth in cultured cells.
de
dc.description.abstract
Das Equine Herpesvirus Typ 1 (EHV-1) ist ein wichtiger Erreger, der weltweit
Populationen von Pferden bedroht und weitreichende, wirtschaftliche Verluste
durch häufige Ausbrüche von respiratorischen und neurologischen Erkrankungen
sowie Aborten verursacht. Die Primärinfektion mit EHV-1 führt zur Etablierung
einer latenen Infektion während der ersten Wochen nach der Geburt. Strikte
Hygienemaßnahmen und Impfungen sind daher die beiden Hauptstrategien zur
Bekämpfung von EHV-1 Infektionen. Obwohl einige Impfstoffe gegen EHV-1 die
schwersten Folgen der Infektion verhindern können, besteht jedoch kein
ausreichender Langzeitschutz. Daher sind bisher viele Anstrengungen
unternommen worden, um die Replikation und die Wachstumseigenschaften des
EHV-1 sowie die Funktion einzelner Genprodukte zu verstehen und diese
Informationen zur Entwicklung effektiver Impfstoffe zu nutzen. Die Funktionen
der EHV-1 Genprodukte ORF34 und ORF59 (pORF34 und pORF59) sind bisher
unbekannt. Die Hauptziele dieser Arbeit waren daher (i) die Identifizierung
und Charakterisierung der EHV-1 pORF34 und pORF59 Genprodukte und (ii) die
Untersuchung ihrer Rolle bei der Pathogenese des EHV-1. Im Kapitel 2 dieser
Arbeit wird die Identifizerung des ORF34 Genprodukts, welches früh während des
Replikationszykluses exprimiert wird, beschrieben. Das Genprodukt lokalisiert
im Zytosol der EHV-1 infizierten Zelle. Analysen mit Hilfe von Immunoblots
erlaubten die Detektion eines Proteins mit einer molekularen Masse von 28 KDa,
die maßgeblich von der auf der Sequenz beruhenden Vorhersage der Größe abwich
(18 kDa). Interessanterweise zeigte sich in Expressionsstudien des pOF34, dass
das Protein bis 10 Stunden nach der Infektion (h p.i.) stabil war. Während
späterer Zeitpunkte der Infektion zeigten sich jedoch zusätzliche Banden,
deren molekulare Massen zwischen 17- bis 28 kDa rangierten. Diese Ergebnisse
implizieren einerseits eine zeitabhängige Stabilität des pORF34 während der
Infektion und andererseits, dass pORF34 möglicherweise nur während frühen
Zeitpunkten nach Infektion benötigt wird oder seine Funktion zu späteren
Zeitpunkten durch die Modifizierung des Proteins im Ubiquitin/Proteasome -Weg
beinflußt wird. Des Weiteren ergab die Untersuchung der Wachstumseigenschaften
einer ORF34 deletierten EHV-1-Mutante (rAb4Δ34), dass das pORF34 für das
effiziente Wachstum während der frühen Stadien der Infektion in vitro
notwendig ist. In Kapitel 3 dieser Arbeit werden Details über das EHV-1
Genprodukt pORF59 und seiner Rolle in der Pathogenese des Viruses beschrieben.
pORF59 wird in den frühen Phasen der Infektion gebildet und lokalisiert im
Zytosol der infizierten Zelle. Analysen mit Hilfe von Immunoblots ermöglichten
die Detektion des pORF59 (mit inseriertem Epitope) als Bande mit einer
molekularen Masse von ca. 21 kDa, in Übereinstimmung mit der theoretisch
vorhergesagten Sequenz. Des Weiteren zeigte eine ORF59 deletierte EHV-1
Mutante (rAb4Δ59) eine verringerte Größe der viralen Plaques und konnte nicht
propagiert werden. Diese Ergebnisse implizieren, dass das ORF59 Protein eine
entscheidene Rolle beim Wachstum des EHV-1 in vitro spielt. Die entscheidenen
Ergebnisse dieser Arbeit können wie folgt zusammengefasst werden: \- Das EHV-1
ORF34 Protein wird während der frühen Phase der Infektion gebildet und
lokalisiert im Zytosol der infizierten Zelle. \- Das ORF34 Protein wird durch
Ubiquitinierung modifiziert und während später Phasen der Infektion durch das
Proteasom abgebaut. \- Das ORF34 Protein wird für die optimale Replikation des
EHV-1 in vitro und in ex vivo infizierten Zielzellen in frühen Phasen der
Infektion benötigt. \- Das EHV-1 ORF59 Protein ist ein 21-kDa Protein, welches
früh während der Infektion gebildet wird. \- Das Produkt des EHV-1 ORF59
lokalisiert im Zytosol von EHV-1-infizierten Zellen. \- Das EHV-1 ORF59
Protein ist essentiell für das EHV-1 Wachstum in vitro.
de
dc.format.extent
IX, 86 Seiten
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
Equine herpesvirus 1
dc.subject
open reading frames
dc.subject
protein products
dc.subject
protein degradation
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::630 Landwirtschaft::630 Landwirtschaft und verwandte Bereiche
dc.title
Molecular characterization of the gene products encoded by open reading frames
34 and 59 of equine herpesvirus type 1 (EHV-1)
dc.contributor.firstReferee
Univ.-Prof. Dr. Klaus Osterrieder
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. Benedikt Kaufer
dc.contributor.furtherReferee
Univ.-Prof. Dr. Robert Klopfleisch
dc.date.accepted
2016-06-10
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000102254-8
dc.title.translated
Molekulare Charakterisierung der Genprodukte des ORF34 sowie ORF59 des Equinen
Herpesvirus Typ 1 (EHV-1)
de
refubium.affiliation
Veterinärmedizin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000102254
refubium.note.author
Mensch und Buch Verlag
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FUDISS_derivate_000000019336
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open access