id,collection,dc.contributor.author,dc.contributor.firstReferee,dc.contributor.furtherReferee,dc.contributor.gender,dc.date.accepted,dc.date.accessioned,dc.date.available,dc.date.issued,dc.description.abstract[de],dc.format.extent,dc.identifier.uri,dc.identifier.urn,dc.language,dc.rights.uri,dc.subject,dc.subject.ddc,dc.title,dc.title.translated[de],dc.type,dcterms.accessRights.dnb,dcterms.accessRights.openaire,dcterms.format[de],refubium.affiliation[de],refubium.mycore.derivateId,refubium.mycore.fudocsId,refubium.note.author "f29fef7b-cd3c-4339-ab43-789c0b4b0d0b","fub188/14","Said, Abdelrahman Fekry Abdelrahman","Univ.-Prof. Dr. Klaus Osterrieder","Prof. Dr. Benedikt Kaufer||Univ.-Prof. Dr. Robert Klopfleisch","m","2016-06-10","2018-06-08T00:25:47Z","2016-06-17T08:45:23.052Z","2016","Equine herpesvirus type 1 (EHV-1) is an important pathogen that threatens horse populations worldwide and causes spacious economic losses through recurrent outbreaks of respiratory, abortion and neurological disease. Primary infections with EHV-1 lead to the establishment of latent infection within the first weeks of life. The two main strategies for controlling EHV-1 infection and disease are strict hygiene and management practices as well as vaccination. Several vaccines exist to prevent the most severe outcomes of EHV-1 infection, but they are insufficient for long-term protection. Therefore, considerable efforts have been developed to understand the replication and growth properties of EHV-1 and the function of its gene products in order to generate information that may be useful in the design of an effective vaccine. Since the functions of the EHV-1 ORF34 and ORF59 protein (pORF34 and pORF59) products are unknown, the overall targets of this thesis are to (i) identify and characterize the EHV-1 pORF34 and pORF59 products and (ii) examine whether they have a role in pathogenesis of EHV-1. In Chapter 2 of this thesis, we focused on the identification of ORF34 product that is expressed with early kinetics and its product is localized within the cytosol of EHV-1- infected cells. Immunoblot analysis of EHV-1 pORF34 detected a protein with the apparent molecular mass of 28-kDa, which is larger than that predicted based on the sequence of the protein (18-kDa). Interestingly, the kinetics of pORF34 expression had shown protein stability until 10 h p.i., however, additional bands with apparent molecular masses ranging between 17- and 28-kDa appeared at later times after infection. Our findings suggested that stability of pORF34 is dependent on the time after infection and that pORF34 may only be required at early times after infection or that its function at later times after infection requires the protein be modified by ubiquitin/proteasome pathway. Furthermore, examination of the replication properties of an EHV-1 lacking ORF34 (rAb4Δ34) revealed that pORF34 is required for efficient virus growth in vitro at early stages of infection. In Chapter 3 of this thesis, we addressed more details about the identification of EHV-1 pORF59 and its role in the EHV-1 pathogenesis. We found that pORF59 is expressed at the early stage of infection and its product is localized in the cytosol of the infected cells. Immunoblot analysis of EHV-1 pORF59, including the inserted epitope, detected a protein with a molecular mass of approximately 21-kDa, which is similar to the predicted sequence of the protein. Moreover, EHV-1 lacking ORF59 (rAb4Δ59) exhibited a small-plaque phenotype and could not be propagated even after serial passages in cell culture. Our findings suggest that the ORF59 protein plays a major role in EHV-1 growth in cultured cells. Generally, a concise list below can show the highlights points of this thesis: \- The EHV-1 ORF34 protein is expressed at early stage of infection and its product is localized in cytosol of EHV-1 infected cells. \- The ORF34 protein is modified by ubiquitination and degraded in the proteasome at late times of infection \- The ORF34 protein is required for optimal replication of EHV-1 in cultured cells and target cells taken directly ex vivo at early times of infection. \- The EHV-1 ORF59 protein is a 21-kDa protein expressed with early kinetics. \- The product of the EHV-1 ORF59 protein localizes to cytosol of EHV-1-infected cells. \- The EHV-1 ORF59 protein is essential for EHV-1 growth in cultured cells.||Das Equine Herpesvirus Typ 1 (EHV-1) ist ein wichtiger Erreger, der weltweit Populationen von Pferden bedroht und weitreichende, wirtschaftliche Verluste durch häufige Ausbrüche von respiratorischen und neurologischen Erkrankungen sowie Aborten verursacht. Die Primärinfektion mit EHV-1 führt zur Etablierung einer latenen Infektion während der ersten Wochen nach der Geburt. Strikte Hygienemaßnahmen und Impfungen sind daher die beiden Hauptstrategien zur Bekämpfung von EHV-1 Infektionen. Obwohl einige Impfstoffe gegen EHV-1 die schwersten Folgen der Infektion verhindern können, besteht jedoch kein ausreichender Langzeitschutz. Daher sind bisher viele Anstrengungen unternommen worden, um die Replikation und die Wachstumseigenschaften des EHV-1 sowie die Funktion einzelner Genprodukte zu verstehen und diese Informationen zur Entwicklung effektiver Impfstoffe zu nutzen. Die Funktionen der EHV-1 Genprodukte ORF34 und ORF59 (pORF34 und pORF59) sind bisher unbekannt. Die Hauptziele dieser Arbeit waren daher (i) die Identifizierung und Charakterisierung der EHV-1 pORF34 und pORF59 Genprodukte und (ii) die Untersuchung ihrer Rolle bei der Pathogenese des EHV-1. Im Kapitel 2 dieser Arbeit wird die Identifizerung des ORF34 Genprodukts, welches früh während des Replikationszykluses exprimiert wird, beschrieben. Das Genprodukt lokalisiert im Zytosol der EHV-1 infizierten Zelle. Analysen mit Hilfe von Immunoblots erlaubten die Detektion eines Proteins mit einer molekularen Masse von 28 KDa, die maßgeblich von der auf der Sequenz beruhenden Vorhersage der Größe abwich (18 kDa). Interessanterweise zeigte sich in Expressionsstudien des pOF34, dass das Protein bis 10 Stunden nach der Infektion (h p.i.) stabil war. Während späterer Zeitpunkte der Infektion zeigten sich jedoch zusätzliche Banden, deren molekulare Massen zwischen 17- bis 28 kDa rangierten. Diese Ergebnisse implizieren einerseits eine zeitabhängige Stabilität des pORF34 während der Infektion und andererseits, dass pORF34 möglicherweise nur während frühen Zeitpunkten nach Infektion benötigt wird oder seine Funktion zu späteren Zeitpunkten durch die Modifizierung des Proteins im Ubiquitin/Proteasome -Weg beinflußt wird. Des Weiteren ergab die Untersuchung der Wachstumseigenschaften einer ORF34 deletierten EHV-1-Mutante (rAb4Δ34), dass das pORF34 für das effiziente Wachstum während der frühen Stadien der Infektion in vitro notwendig ist. In Kapitel 3 dieser Arbeit werden Details über das EHV-1 Genprodukt pORF59 und seiner Rolle in der Pathogenese des Viruses beschrieben. pORF59 wird in den frühen Phasen der Infektion gebildet und lokalisiert im Zytosol der infizierten Zelle. Analysen mit Hilfe von Immunoblots ermöglichten die Detektion des pORF59 (mit inseriertem Epitope) als Bande mit einer molekularen Masse von ca. 21 kDa, in Übereinstimmung mit der theoretisch vorhergesagten Sequenz. Des Weiteren zeigte eine ORF59 deletierte EHV-1 Mutante (rAb4Δ59) eine verringerte Größe der viralen Plaques und konnte nicht propagiert werden. Diese Ergebnisse implizieren, dass das ORF59 Protein eine entscheidene Rolle beim Wachstum des EHV-1 in vitro spielt. Die entscheidenen Ergebnisse dieser Arbeit können wie folgt zusammengefasst werden: \- Das EHV-1 ORF34 Protein wird während der frühen Phase der Infektion gebildet und lokalisiert im Zytosol der infizierten Zelle. \- Das ORF34 Protein wird durch Ubiquitinierung modifiziert und während später Phasen der Infektion durch das Proteasom abgebaut. \- Das ORF34 Protein wird für die optimale Replikation des EHV-1 in vitro und in ex vivo infizierten Zielzellen in frühen Phasen der Infektion benötigt. \- Das EHV-1 ORF59 Protein ist ein 21-kDa Protein, welches früh während der Infektion gebildet wird. \- Das Produkt des EHV-1 ORF59 lokalisiert im Zytosol von EHV-1-infizierten Zellen. \- Das EHV-1 ORF59 Protein ist essentiell für das EHV-1 Wachstum in vitro.","IX, 86 Seiten","https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/11911||http://dx.doi.org/10.17169/refubium-16109","urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000102254-8","eng","http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen","Equine herpesvirus 1||open reading frames||protein products||localization||pathogens||protein degradation||ubiquitin","600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::630 Landwirtschaft::630 Landwirtschaft und verwandte Bereiche","Molecular characterization of the gene products encoded by open reading frames 34 and 59 of equine herpesvirus type 1 (EHV-1)","Molekulare Charakterisierung der Genprodukte des ORF34 sowie ORF59 des Equinen Herpesvirus Typ 1 (EHV-1)","Dissertation","free","open access","Text","Veterinärmedizin","FUDISS_derivate_000000019336","FUDISS_thesis_000000102254","Mensch und Buch Verlag"