dc.contributor.author
Liu, Zhong
dc.date.accessioned
2018-06-07T23:17:39Z
dc.date.available
2008-10-10T12:54:56.758Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/10303
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-14501
dc.description.abstract
To prevent anti-D immunization during pregnancy through the transplacental
haemorrhaging of fetal erythrocytes in D-negative women, antenatal and
postnatal anti-D prophylaxis is applied routinely in many countries, including
Germany. However, anti-D is frequently not indicated. In a predominantly
Caucasian population, 15-18 % of all pregnancies occur in D-negative women. In
about 40% of all these cases the fetus is D-negative and antenatal anti-D
prophylaxis is applied unnecessarily. Consequently, it would be beneficial if
a method (especially a high-throughput method) was available for determining
the fetal D type in all D-negative pregnant women. Since Lo Y.M. reported that
fetal DNA was present and could be detected in maternal plasma in 1997 (Lo YM.
et al. 1997), many researchers have started to investigate the fetal RhD
status from fetal DNA extracted from the maternal plasma. However, the amount
of fetal DNA is rather low, especially early in gestation, and this kind of
research is therefore facing a huge challenge. In this thesis, two methods
were developed for extracting fetal DNA from maternal plasma. Firstly, the
QIAamp DSP Virus Kit (Qiagen) was optimized to extract fetal DNA from maternal
plasma. The 95% detection limit was determined at 138 pg/ml (21 geq/ml).
Secondly, a hybridization capture method combined with magnetic particles
(HCMP) was developed using specific hybridization primers for the extraction
of fetal DNA. The HCMP method was automated by adapting a commercially
available liquid handling robot. The 95% detection limit was determined at 286
pg/ml (43 geg/ml). In order to evaluate the two optimized methods, an
international survey on the extraction of fetal DNA from maternal plasma was
held. The highest yield was obtained by the optimized QIAamp DSP Virus
extraction method, higher than the frequently used QIAamp DNA Blood Mini Kit.
Among the automated methods the HCMP method showed results comparable with
other instruments evaluated. Key Words: Fetal DNA, RhD, noninvasive prenatal
diagnosis, enrichment, high-throughput, hybridization capture, magnetic
particles
de
dc.description.abstract
Um eine Immunisierung Rh(D)-negativer Frauen durch diaplazentar übertragene
fetale Erythrozyten während der Schwangerschaft zu vermeiden, wird in vielen
Ländern, einschließlich Deutschland, eine ante- bzw. postpartale
Anti-D-Immunprophylaxe durchgeführt. Diese Anti-D-Gabe ist jedoch häufig nicht
indiziert. Dies resultiert aus dem Umstand, dass in einer vorwiegend
kaukasisch geprägten Population 15-18% aller Schwangerschaften Rh(D)negative
Frauen umfassen. In etwa 40% dieser Schwangerschaften ist der Fetus
Rh(D)-negativ und daher keine Anti-D-Immunprophylaxe erforderlich. Insofern
ist es sinnvoll, eine möglichst automatisierte Methode zu entwickeln, die den
fetalen Rh(D)-Faktor zuverlässig ermitteln kann. Seit Y.M. Lo im Jahr 1997
berichtete, dass fetale DNA in mütterlichem Plasma vorhanden und nachweisbar
war, haben viele Arbeitsgruppen versucht den fetalen Rh(D)-Status aus diesem
Material zu bestimmen. Als limitierender Faktor erwies sich dabei die geringe
Konzentration an fetaler DNA, insbesondere in der frühen Schwangerschaft, so
dass die Entwicklung zuverlässiger Methoden eine große Herausforderung an die
wissenschaftliche Arbeit darstellt. In der vorliegenden Arbeit wurden zwei
Methoden der Extraktion fetaler DNA aus mütterlichem Plasma entwickelt. Primär
wurde der QIAamp DSP Virus-Extraktionskit (Qiagen) für diesen Zweck soweit
optimiert, dass eine Nachweisgrenze (95% detection limit) von 138 pg/ml bzw.
21 geq/ml erreicht wurde. Danach wurde unter Verwendung von spezifischen
Hybridisationsprimern für die Extraktion fetaler DNA eine Hybridisierungs-
Capture-Methode mit magnetischen Partikeln (HCMP) kombiniert und unter
Benutzung eines adaptierten Pipettierroboters automatisiert. Die
Nachweisgrenze (95% detection limit) lag hier bei 284 pg/ml bzw. 43 geq/ml. Im
Rahmen eines internationalen Workshops wurden die Methoden evaluiert und die
im Rahmen der vorliegenden Arbeit optimierte QIAamp DSP-Virus-
Extraktionsmethode gegenüber der häufiger eingesetzten QIAamp DNA Blood Mini
Kit Methode als sensitiver und damit diagnostisch effizienter bewertet. Die
automatisierte HCMP-Methode wurde im Vergleich zu anderen
Automatisationskonzepten als gleichwertig eingestuft.
de
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
noninvasive prenatal diagnosis
dc.subject
high-throughput
dc.subject
hybridization capture
dc.subject
magnetic particles
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
High-throughput Testing for the Determination of the Fetal Rh Factor in
Maternal Plasma
dc.contributor.contact
doris.reinhold@charite.de
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. Gerhard Pindur
dc.contributor.furtherReferee
Priv.-Doz. Dr. Christian von Heymann
dc.contributor.furtherReferee
Priv.-Doz. Dr. Axel Pruß
dc.date.accepted
2008-11-21
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000005584-2
dc.title.translated
Nachweis des fetalen Rhesusfaktors im mütterlichen Blut bei großem
Probenumfang
de
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000005584
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000011299
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access