dc.contributor.author
Schüler, Jens
dc.date.accessioned
2018-06-07T22:33:18Z
dc.date.available
2000-03-08T00:00:00.649Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/9393
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-13592
dc.description
Abstract
3
1 Einleitung
5
1.1
Die zellulare Eisenaufnahme bei Vertebraten
5
1.2
Struktur und Bindungsverhalten des hTfR
7
1.3
Zielsetzung der Studie
8
2 Materialien und Methoden
11
2.1
Lichtstreuung
11
2.1.1
Die statische Lichtstreuung
12
2.1.2
Die Photonenkorrelationsspektroskopie
14
2.1.3
Experimentelle Durchführung
16
2.2
Fluoreszenz und Fluoreszenzkorrelationspektroskopie
19
2.2.1
Theorie der Fluoreszenzkorrelationsspektroskopie
21
2.2.2
Experimentelle Durchführung
23
2.3
Kalorimetrie
26
2.3.1
Differenz Scanning Kalorimetrie
27
2.3.2
Differenz-Titrations-Kalorimetrie
29
2.4
Analytische Ultrazentrifugation
31
2.4.1
Experimentelle Durchführung
32
2.5
Circulardichroismus (CD)
34
2.5.1
Experimentelle Durchführung
36
2.6
Proteinreinigung und Probenvorbereitung
37
2.6.1
Reinigung des Transferrinrezeptors
37
2.6.2
Probenvorbereitung
40
3 Ergebnisse
43
3.1
Kolloidale Eigenschaften
43
3.2
Aggregationsverhalten
46
3.3
Rezeptor-Ligand Wechselwirkungen
58
4 Diskussion
67
4.1
Kolloidale Eigenschaften
67
4.2
Aggregation
69
4.3
Rezeptor-Ligand Wechselwirkungen
78
4.4
Zusammenfassung und Ausblick
82
5 Literaturverzeichnis
85
Abbkürzungen
89
Danksagung
90
Lebenslauf
91
dc.description.abstract
Zusammenfassung
Im Rahmen der vorliegenden Studie wurden die kolloidalen Eigenschaften des
humanen Transferrinrezeptors (hTfR) in detergenzfreier Lösung mit Hilfe von
Lichtstreuung und analytischer Ultrazentrifugation untersucht. Bei einer
Temperatur von 293 K und pH 7,5 bildet hTfR definierte Aggregate mit einem
apparenten hydrodynamischen Radius von 17 nm. Diese Aggregate bestehen aus 9
hTfR Dimeren, welche so angeordnet sind, daß eine torusförmige Struktur
entsteht. Neben den Aggregaten konnten weder durch Lichtstreuung noch durch
analytische Ultrazentrifugation freie Dimere nachgewiesen werden.
Durch Erhöhen der Temperatur auf 340 K, Absenken des pH Wertes auf 5.0 oder
N-Deglykosylierung läßt sich eine weitere Aggregation des hTfR induzieren.
Diese Aggregation verläuft nach einem RLCA (reaction limited colloidal
aggregation) Mechanismus. Im Verlauf der temperaturinduzierten Aggregation
bilden sich mikrokristalline Strukturen. Daraus läßt sich schließen, daß neben
der RLCA Aggregation auch ein Nukleationsprozess auftritt.
Die Wechselwirkungen zwischen hTfR und seinem Liganden Transferrin wurden mit
Hilfe der Fluoreszenzkorrelationsspektroskopie untersucht. Hierbei wurden die
Bindungs- und Geschwindigkeitskonstanten der Reaktion bestimmt. Die
experimentellen Befunde lassen sich mit einer Bindung von Transferrin an
gleiche und unabhängige Bindungsstellen beschreiben.
de
dc.description.abstract
Abstract
In the present study the colloidal properties of human Transferrinreceptor
(hTfR) in detergent free solution were studied using light scattering
techniques and analytical ultracentrifugation. At a temperature of 293 K and
at pH 7.5, hTfR forms stable and clearly defined aggregates with an apparent
hydrodynamic radius of 17 nm. Those aggregates include 9 receptor dimers,
which form a toruslike structure. Receptor dimers could not be detected.
Further aggregation can be induced by increasing the temperature to 340 K,
lowering the pH to 5.0 or N-deglycosylation. Aggregation occurs according to a
RLCA (reaction limited colloidal aggregation) scheme. Crystalline structures
are formed during the temperature induced aggregation. Therefore a nucleation
process must accompany the reaction limited aggregation. A simple modell for
the aggreation of hTfR is given on the basis of DLVO theory.
Interaction between hTfR and it´s ligand Transferrin were studied by
fluorescence correlation spectroscopy. Binding and rate constants were
determined. The experimental results are compatible with the binding of
Transferrin to equal and independent binding sites.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
fractal aggregation
dc.subject
transferrin receptor
dc.subject
light scattering
dc.subject.ddc
500 Naturwissenschaften und Mathematik::540 Chemie::540 Chemie und zugeordnete Wissenschaften
dc.title
Kolloidale Eigenschaften des humanen Transferrinrezeptors
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. Wolfram Saenger
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. Monika Schäfer-Korting
dc.date.accepted
2000-03-01
dc.date.embargoEnd
2000-08-24
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-2000000361
dc.title.translated
Colloidal properties of human transferrinreceptor
en
refubium.affiliation
Biologie, Chemie, Pharmazie
de
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FUDISS_thesis_000000000276
refubium.mycore.transfer
http://www.diss.fu-berlin.de/2000/36/
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FUDISS_derivate_000000000276
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free
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open access