dc.contributor.author
Adolph, Kerstin
dc.date.accessioned
2018-06-07T22:28:43Z
dc.date.available
2006-08-05T00:00:00.649Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/9310
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-13509
dc.description
Titelblatt und Eidesstattliche Erklärung und Inhaltsverzeichnis
Einleitung
Aufgabenstellung
Anglizismen und Abkuerzungen
Material und Methoden
Ergebnisse
Diskussion
Zusammenfassung
Literatur
dc.description.abstract
Ein charakteristisches Merkmal von rheumatischen Autoimmunerkrankungen wie der
Rheumatoiden Arthritis (RA) ist das Vorhandensein von Autoantikörpern gegen
zelluläre Bestandteile. Einige Autoantikörper kommen interessanterweise
spezifisch bei diesen Erkrankungen vor und könnten zukünftig als wertvolle
diagnostische Marker dienen. Außerdem könnten diese Antigene bei der
Aufklärung der Pathomechanismen der Erkrankungen von Bedeutung sein, zumal es
sich bei den Epitopen der Antikörper häufig um die funktionellen Domänen
dieser Moleküle handelt. Im Rahmen dieser Arbeit konnte erstmals ein neues
Autoantigen, das heterogene Ribonukleoprotein A3 (hnRNPA3) identifiziert
werden. Autoantikörper gegen spliceosomale Ribonukleoproteine, wie die hnRNPs,
sind typisch für einige Erkrankungen aus dem rheumatischen Formenkreis. Das am
besten charakterisierte unter den rund 30 als Autoantigenen bekannten hnRNPs
ist das hnRNPA2, besser bekannt als RA33. Im ELISA reagierten 20-30% der RA-,
SLE- und MCTD-Patienten mit dem Protein, aber keine gesunden Kontrollen und
keine Patienten mit Osteoarthrose. Bei dem von den Serum-Antikörpern erkannten
Epitop handelt es sich um die funktionellen RNA-bindenden Domänen (RBD), in
erster Linie um die RBD1. Gemäß den immunhistologischen Daten ist A3
vorwiegend im Kern lokalisiert. Es besitzt aber auch eine Sequenz, die große
Homologien zur M9-Transportsequenz aufweist, die den Transport zwischen Kern
und Zytoplasma gewährleistet. Die histologischen Färbungen wie auch die
Gewebeblots zeigten, dass A3 in den meisten Geweben, allerdings in
unterschiedlichen Varianten, exprimiert wird. In Gewebeschnitten von Patienten
mit Lungenkrebs sowie in entzündlichen Synovialmembranen von RA-Patienten
konnte eine stark erhöhte Expression von A3 nachgewiesen werden. Als ein
weiteres Autoantigen wurde das zur Hitzeschockprotein-Familie gehörende
Protein BiP (heavy chain binding protein) untersucht. Die ursprünglich
beschriebene Sensitivität von 64% gegen BiP aus HeLa-Zellen aus dem 1D-
Immunoblot, konnte nach 2D-elektrophoretischer Auftrennung nicht bestätigt
werden, da sich in der als BiP identifizierten Bande noch andere Antigene
befanden. Gegen rekombinant in Bakterien hergestelltes, BiP reagierten nur
noch 20 % der RA-Patienten. Die Kartierung des Antikörperepitopes zeigte, dass
die meisten Seren das Fragment 1-509 erkannten. Dieses Fragment weist je doch
große Homologien zu anderen Hitzeschockproteinen auf, so dass
Kreuzreaktivitäten nicht ausgeschlossen werden können. Die Ergebnisse zeigen,
dass Antikörper gegen A3 und BiP nicht als alleinige Parameter für die
Diagnostik in Frage kommen, jedoch als komplementäre Marker bedeutsam sein
können. Bislang gibt es für die RA keine zu 100% spezifischen Antigene, und
selbst hoch-spezifische Marker wie gegen citrullinierte Proteine gerichtete
Antikörper und insbesondere Rheumafaktoren treten bei anderen Erkrankungen
sowie bei gesunden Spendern auf und lassen noch keine eindeutige Auskunft über
die Klinik und Prognose zu. Derzeit befinden sich vielmehr auf Teststreifen
basierende Analysemethoden in der Entwicklung, deren Ziel es ist, eine Reihe
von Antigenen oder Autoantigenen gemeinsam zu testen. Die serologische
Diagnose soll dann anhand eines entsprechenden Musters an Antikörpern und der
Gesamtintensität der Serumreaktivität erfolgen. Für ein solches
Diagnoseverfahren wird auch A3 als Autoantigen zum Einsatz kommen.
de
dc.description.abstract
Rheumatic diseases like arthritis (RA) are characterized by autoantibodies to
cellular components. Some of these autoantibodies are disease specific and
could be used as diagnostic markers. Furthermore these antibodies can possible
enlighten the pathomechanisms of these diseases, especially because the
autoantibodies epitope are mostly functional domains of the targeted proteins.
In this work a novel autoantigen, the heterogeneous ribonucleoprotein A3
(hnRNP A3) was identified. Autoantibodies to splicesosomal ribonucleoproteins
are characteristic features for rheumatic diseases. The best characterized
hnRNP among the 30 as antigen known hnRNPs is the hnRNP A3 (RA33). Using ELISA
technique to detect the serum reactivity showed that 20-30% of sera from
patients with RA, Systemic Lupus Erythematosus and Mixed Connective Tissue
Disease reacted with A3 but no sera from patients with osteoarthritis and
healthy individuals. The autoantibodies epitope were the functional RNA
binding domains (RBD), especially the RBD1. According to the
immunohistological data A3 is predominantly expressed in the nuclei. A3 also
contains a peptide sequence, which is similar to the M9 sequence of some
hnRNPs and which guarantees the shuttle between nucleus and cytoplasm. The
immunohistological stainings as well as immunoblot data showed that A3 is
expressed in several tissues in about five different variants. In tissue
slides of lung cancer and inflamed synovial membranes of RA patients were
increased amounts of A3 detectable compared to normal tissue. Another
autoantigen, which was characterized into this study, was the heavy chain
binding protein BiP, a heat shock protein, which was previously described as
specific for RA. The previously described reactivity of 64% could not be
confirmed using 2D electrophoresis and immunoblotting. This technique revealed
the presence of other heat shock proteins with similar molecular masses to
which autoantibodies are directed. 20% of RA sera were reactive with the
recombinant expressed BiP. The autoantibodies epitope, a fragment containing
the amino acids 1-509, showed a high homology to other hsps like hsc71, hsp75.
It seemed as crossreactivities to other hsps are responsible for the
previously described reactivity of 64%. These results demonstrated that
neither the specifity of A3 nor the specifity of BiP is sufficient for the use
as unique marker for the serologic diagnostic of RA, but both proteins can be
employed in combination with other antigens. Until now there is no 100%
specific autoantibody/marker for RA and specific markers like citrullinated
proteins occur also in individuals with other diseases and also in healthy
volunteers. At present there are strip tests in development, which contain a
multiple set of antigens. The evaluation will be done according to reactivity
pattern. A3 will be employed in this diagnostic tool.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
rheumatoid arthritis
dc.subject
autoantibodies
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Charakterisierung von spezifischen Autoantigenen bei der Rheumatoiden
Arthritis
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. med G.-R. Burmester
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. med. B. Manger
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. med. E. Märker-Hermann
dc.date.accepted
2006-07-17
dc.date.embargoEnd
2006-08-15
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000002254-1
dc.title.translated
Characterization of specific Autoantigens in Rheumatoid Arthritis
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
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FUDISS_thesis_000000002254
refubium.mycore.transfer
http://www.diss.fu-berlin.de/2006/404/
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open access