Die Bedeutung der Proteinkinase C für die Regulation des proteinvermittelten Fettsäuretransportes in humanen Thrombozyten

Abstract

Ziel der vorliegenden Arbeit war es, die Regulation der initialen Aufnahme langkettiger Fettsäuren in humanen Thrombozyten zu untersuchen. Zunächst konnten wir zeigen, dass die initiale Aufnahme langkettiger Fettsäuren, zumindest im physiologischen Konzentrationsbereich freier Fettsäuren, überwiegend proteinvermittelt ist. Die zu Beginn der Untersuchung vorliegenden Kenntnisse über den proteinvermittelten Fettsäuretransport machten eine Beteiligung von CD36 wahrscheinlich. Wir untersuchten deshalb die intrazelluläre Phosphorylierung von CD36 und deren Bedeutung für den Fettsäuretransport in Thrombozyten. Wir zeigten eine PKC-vermittelte Steigerung der initialen Fettsäureaufnahme humaner Thrombozyten, die mit einer Phosphorylierung von CD36 korreliert. Bei der Untersuchung verschiedener Signaltransduktionswege hatte die Aktivierung der PKC den deutlichsten Einfuß auf die Fettsäureaufnahme. Die indirekte und direkte Aktivierung der Proteinkinase Ca/b führte zu einer signifikanten Erhöhung der Palmitinsäureaufnahme in Thrombozyten. Umgekehrt verhinderte die Hemmung der PKC durch Chelerythrine die PMA-vermittelte Erhöhung der Fettsäureaufnahme. Unsere Ergebnisse bestätigen den Phosphorylierungsstatus von CD36 in ruhenden Thrombozyten und zeigen darüber hinaus, dass eine Fraktion des CD36 durch die Aktivierung der PKCa/b zusätzlich phosphoryliert wird. Diese Aktivierung geht mit einer 2,54-fachen Steigerung der Aufnahme von Palmitinsäure in Thrombozyten einher. Möglicherweise lässt sich die Konzentration freier Fettsäuren in Zukunft durch die Regulation membranständiger Fettsäuretransporter steuern.

The aim of the study was to evaluate the initial uptake of long chain fatty acids in human thrombocytes. We were able to show that the initial uptake of long chain fatty acids is a mostly protein mediated process. We hypothesized that CD 36 is partially involved in this protein mediated uptake mechanism. For this reason we evaluated the intracellular phosphorylation of CD 36 and its role for the long chain fatty acid transport in human thrombocytes. We showed a protein kinase C (PKC)–mediated increase of the initial fatty acid uptake that positively correlated with the CD 36 phosphorylation. Several signal pathways were examined and the PKC-mediated pathway showed the greatest influence on the fatty acid uptake. The direct and indirect activation of the PKC (α/β) lead to a significant increase in the uptake of palmitic acid in human thrombocytes. In contrary an inhibition of the PKC with chelerythrine resulted in no increase in palmitic acid uptake. Our results confirm the phosphorylation status of non activated human thrombocytes and furthermore demonstrate that a fraction of CD 36 is phosphorylated via the PKC (α/β). This PKC-mediated activation results in a 2.54 –fold increase of the palmitic acid uptake in human thrombocytes.