dc.contributor.author
Oberender, Christian
dc.date.accessioned
2018-06-07T22:08:45Z
dc.date.available
2014-08-20T09:26:32.999Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/8911
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-13110
dc.description.abstract
Better understanding of the transformation of chronic myeloid leukemia (CML)
from chronic phase (CP) to the invariably fatal blast phase (BP) is of
critical importance for the clinical management of patients with CML. However,
the mechanisms responsible for triggering disease progression have eluded
investigators’ efforts. Recently, our group verified reported data showing
increased levels of Musashi-2 (MSI2) transcripts in patients with CML in BP
compared to those in CP, implying a role for MSI2 in CML transformation1-3.
The Musashi gene family is reported to control critical cell fate decisions by
binding to target mRNAs, including the NUMB mRNA, thereby inhibiting
translation4,5. Unregulated increased expression of MSI2 results in the
dysfunction of NUMB-Notch signalling, leading to haematopoietic stem cell
(HSC) proliferation, impaired myeloid differentiation and worse clinical
prognosis in CML2,3. Therefore, we hypothesized that mutations mapping to the
NUMB gene may perturb this signalling pathway and thereby influence CML
transformation. I tested this notion by directly sequencing the entire NUMB
transcript in 22 patients with CML of whom 10 were in CP and 12 were in BP.
Archived RNA extracted from peripheral blood from subjects with CML was
reverse transcribed to cDNA and the entire NUMB gene transcript was amplified.
The amplified products were subjected to Sanger sequencing. For the 22
patients with CML, the NUMB gene transcript sequence was determined to be
identical to the published wild type sequence, apart from two previously
reported single nucleotide polymorphisms (SNP) mapping to the 3’-UTR:
rs11625196 (C/G) and rs7202 (C/T) 6,7. I observed no significant difference in
the distribution of the genotypes of the two SNP between that reported for
normal healthy individuals and the CML patients, nor between the different
disease phases. However, rs7202 genotype had significant influence on the
mortality rate of patients in BP – an observation which was fortuitously
biased by different treatment modalities. The software tools Mfold and SNPfold
predicted a negligible effect of the two SNP on the secondary structure of
NUMB mRNA. In a summary, these observations suggest that NUMB, which regulates
Notch, Hedgehog and p53 signalling, is not the primary cause of CML
evolution8-11. However, it would be prudent to confirm this finding in a study
with greater number of CML CP and BP patients and/or using a sequencing method
with higher sensitivity, such as deep-gene sequencing.
de
dc.description.abstract
Ein besseres Verständnis der molekularbiologischen Vorgänge, die zur
Transformation der chronischen myeloischen Leukämie (CML) von der relativ
indolenten chronischen Phase (CP) zur fatalen Blastenkrise führen, ist von
entscheidender Bedeutung für das klinische Management von CML-Patienten.
Unsere Arbeitsgruppe konnte vorher publizierte Daten bestätigen, die eine
höhere Expression von Musashi-2 (MSI2) in der Blastenkrise im Vergleich zur CP
zeigten. Eine Funktion von MSI2 im Rahmen der Transformation der CML wird
diskutiert1-3. Die Mitglieder der Musashi-Genfamilie gelten als Regulatoren
von Zellteilung und Zelldifferenzierung unreifer Zellen und agieren, indem sie
die Translation bestimmter mRNAs wie der NUMB mRNA inhibieren4,5. Eine
Dysregulation von MSI2 führt zu einer Dysfunktion des NUMB-Notch-Signalweges
und daraufhin zu einer verstärkten Proliferation hämatopoietischer Stammzellen
(HSC), einer eingeschränkten myeloischen Differenzierung und einer
schlechteren Prognose2,3. Wir vermuteten, dass Mutationen im NUMB-Gen den
NUMB-Notch-Signalweg deregulieren und zur CML-Transformation beitragen können.
Diese Vermutung testete ich, indem ich NUMB cDNA von 22 CML-Patienten, davon
10 in CP und 12 in BP, nach der Sanger-Kettenabbruchmethode sequenzierte.
Dafür wurde RNA aus dem peripheren Blut von CML-Patienten extrahiert und
revers transkribiert zu cDNA. Das gesamte Transkript des NUMB-Genes wurde
mittels PCR amplifiziert und daraufhin sequenziert. Unter den 22 CML-Patienten
fanden sich keine Abweichungen der NUMB cDNA-Basensequenz im Vergleich zur
publizierten Wildtyp-Sequenz, abgesehen von zwei Einzelnukleotid-
polymorphismen (SNP) in der 3‘-untranslatierten Region: rs11625196 (C/G) und
rs7202 (C/T) 6,7. Ich konnte keine signifikanten Unterschiede im Auftreten der
SNP-Genotypen zwischen gesunden Kontrollpersonen und CML-Patienten oder
zwischen CP- und Blastenkrise-Patienten beobachten. Allerdings zeigte sich ein
signifikanter Einfluss des rs7202-Genotyps auf die Mortalität von
Blastenkrise-Patienten. Diese Beobachtung ist jedoch am ehesten auf ungleiche
Therapieregime zurückzuführen. Mfold- und SNPfold-Software sagen einen
vernachlässigbaren Effekt der beiden SNPs auf die räumliche NUMB-mRNA-Struktur
vorher. Zusammengefasst weisen die Beobachtungen dieser Studie daraufhin, dass
NUMB-Mutationen nicht als die primäre Ursache der CML-Transformation anzusehen
sind. Dennoch wäre es gerechtfertigt, die Erkenntnisse dieser Studie mit einer
größeren Anzahl an CML-Patienten oder auch einer sensitiveren Next-Generation-
Sequenzierungsmethode zu überprüfen.
de
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
chronic myeloid leukemia
dc.subject
chronic myelogenous leukemia
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Sequence analysis of the NUMB gene in chronic myeloid leukaemia patients
dc.contributor.contact
christian.oberender@charite.de
dc.contributor.firstReferee
N.N.
dc.contributor.furtherReferee
N.N.
dc.date.accepted
2014-09-12
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000096990-5
dc.title.translated
Sequenzierung des NUMB-Gens in Patienten mit Chronischer Myeloischer Leukämie
de
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000096990
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000015422
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access