dc.contributor.author
Westphal, Julie Katharina
dc.date.accessioned
2018-06-07T21:43:29Z
dc.date.available
2012-03-30T10:44:46.202Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/8329
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-12528
dc.description.abstract
Die Abdichtung des Interzellularspalts durch die Tight Junctions ist für
Epithelien und Endothelien von zentraler Bedeutung, um als effektive Barriere
den parazellulären Transport zwischen den Zellen hindurch zu kontrollieren.
Als Hauptkomponenten der Tight Junctions wurden Occludin und die Familie der
Claudine beschrieben. In einer kürzlich veröffentlichten Studie konnte
Tricellulin als weiteres integrales Membranprotein identifiziert werden, das
hauptsächlich an Kontaktstellen von drei benachbarten Zellen lokalisiert ist.
Das spezielle Interesse dieser Arbeit lag darin, Tricellulin funktionell zu
charakterisieren. Dabei konnte durch immunfluoreszenzmikroskopische
Untersuchungen gezeigt werden, dass die C-terminale cytoplasmatische Domäne
von Tricellulin für die Membranlokalisation wichtig ist. Der N-Terminus ist an
der bevorzugten Lokalisation in trizellulären Tight Junctions beteiligt. In
funktionellen Untersuchungen an stabil transfizierten MDCK C11-Klonen konnte
im Rahmen dieser Arbeit nachgewiesen werden, dass die cytoplasmatischen
Domänen von Tricellulin jedoch auf den transepithelialen Widerstand sowie die
Permeabilitätseigenschaften eines Epithels keinen Einfluss haben. Diese
Parameter werden vermutlich durch die extrazellulären Loops reguliert. Mit
weiterführenden Analysen konnte anhand von Co-Immunpräzipitationsexperimenten
gezeigt werden, dass Tricellulin homomere Komplexe ausbildet. Ferner lassen
die Ergebnisse dieser Arbeit vermuten, dass diese Tricellulin-Tricellulin-
Assoziation durch die Transmembrandomänen oder die extrazellulären Domänen des
Proteins vermittelt wird. Zudem wurde nachgewiesen, dass Tricellulin und
Occludin heteromere Proteinkomplexe ausbilden. Diese Interaktion erfolgt
ebenfalls über die Transmembrandomänen oder die extrazellulären Loops. Die
physiologische Bedeutung dieser Komplexe ist bisher jedoch noch nicht im
Detail geklärt. Untersuchungen zu posttranslationalen Modifikationen von
Tricellulin ergaben, dass sich Tricellulin und Occludin hinsichtlich der
Kinasen, die beide Proteine modifizieren, unterscheiden. So wird der
C-Terminus von Occludin durch CK1 und CK2 phosphoryliert, wohingegen für den
C-Terminus von Tricellulin keine Phosphorylierung nachgewiesen werden konnte.
Es konnten jedoch Hinweise für eine Phosphorylierung von Tricellulin durch PKA
erarbeitet werden. Als weitere posttranslationale Modifikation konnte eine
Ubiquitinierung von Tricellulin nachgewiesen werden. Die beobachtete Mono-
Ubiquitinierung ist möglicherweise an der Regulation der Endocytose von
Tricellulin beteiligt, die durch Zelloberflächen-Biotinylierungsexperimente
nachgewiesen werden konnte.
de
dc.description.abstract
Sealing the intercellular space by tight junctions is essential for
endothelial and epithelial cell-sheets for controlling paracellular transport.
As the main components of tight junctions occludin and the family of the
claudins were identified. A recently published study presented tricellulin as
a new integral membrane protein located predominantly at contact-sites between
three neighbouring cells. The special interest of this work was the functional
characterization of tricellulin. Immunofluorescence microscopic analyses
depicted a role of the C-terminal cytoplasmic domain for cell surface
localisation of tricellulin. In contrast the N-terminus is involved in the
preferred assembly in tricellular tight junctions. Functional analyses with
stable transfected MDCK C11-clones revealed, that the cytoplasmic domains of
tricellulin do not affect the paracellular resistence or the barrier
properties of an epithelial cell-layer. These parameter are presumably
regulated by the extracellular loops. Co-immunoprecipitation experiments
indicated the existence of homomeric Tricellulin complexes. Furthermore, the
results of this study suggest that the tricellulin-tricellulin association is
mediated by the transmembrane domains or the extracellular loops of the
protein. Furthermore, it was demonstrated, that tricellulin and occludin
accumulate in heteromeric complexes. This interaction similary appears to be
mediated by the transmembrane domains or the extracellular loops of both
proteins. So far, the physiological role of these complexes is not known in
detail. Assays concerning posttranscriptional modifications displayed, that
tricellulin and occludin are phosphorylated by different kinases. The
C-terminus of Occludin is modified by CK1 and CK2 whereas these kinases do not
phosphorylate the C-terminus of Tricellulin. However, there is evidence for a
phosphorylation of tricellulin by PKA. Moreover modification of tricellulin by
ubiquitin was shown in this work for the first time. The observed mono-
ubiquitination is potentially involved in the regulation of endocytotic
internalisation of tricellulin. Endocytosis of tricellulin was confirmed by
cell-surface-biotinylation-experiments.
en
dc.format.extent
VII, 95 S.
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
Tricellulin-Lokalisation
dc.subject
Tricellulin-Interaktion
dc.subject
Tight Junction
dc.subject
Zell-Zell-Kontakte
dc.subject.ddc
500 Naturwissenschaften und Mathematik::570 Biowissenschaften; Biologie::572 Biochemie
dc.title
Struktur, Funktion und Regulation des Tight Junction-Proteins Tricellulin
dc.contributor.firstReferee
Professor Dr. Otmar Huber
dc.contributor.furtherReferee
Professor Dr. Rupert Mutzel
dc.date.accepted
2010-02-12
dc.date.embargoEnd
2012-01-08
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000016002-7
dc.title.translated
Structure, function and regulation of the tight junction protein Tricellulin
en
refubium.affiliation
Biologie, Chemie, Pharmazie
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000016002
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000007108
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access