dc.contributor.author
Edemir, Bayram
dc.date.accessioned
2018-06-07T20:35:27Z
dc.date.available
2004-03-24T00:00:00.649Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/6975
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-11174
dc.description
Title
1\. Einleitung 1
2\. Material und Methoden 21
3\. Ergebnisse 29
4\. Klonierung und Charakterisierung der Ht31/Rt31 cDNA 54
5\. Diskussion 55
6\. Ausblick 63
7\. Zusammenfassung 64
8\. Abstract 65
9\. Literatur 66
10\. Anhang 83
dc.description.abstract
Das Hormon AVP reguliert die Wasserrückresorbtion in den Prinzipalzellen
renaler Sammelrohre. Die Bindung von AVP an den V2-Rezeptor führt zur
Stimulation der cAMP-Bildung und somit zur Aktivierung der PKA, die im
folgenden AQP2 phosphoryliert. AQP2 wird daraufhin an die apikale Zellmembran
lokalisiert. Durch AQP2 in der Zellmembran kann Wasser aus dem hypotonen Urin
reabsorbiert werden. Neben der Aktivität der PKA ist auch deren Verankerung
über AKAP eine Voraussetzung für die AQP2-Translokation. Auf der Suche nach
dem oder den beteiligten AKAP konnte im Rahmen dieser Arbeit mit AKAP18δ eine
weitere AKAP18-Isoform kloniert und charakterisiert werden. So konnte die
Expression von AKAP18δ in IMCD-Zellen in Western Blot-Analysen und nach einer
Immunpräzipitation mit dem Antikörper A18d3 in einem RII-Overlay nachgewiesen
werden. Die in vivo AKAP Funktion konnte zum einen durch cAMP-Agarose-
Präzipitation und zum anderen in lebenden Zellen mit Hilfe der FRET-Technik
nachgewiesen werden. Mit Hilfe der FRET-Technik konnte der inhibitorische
Effekt des Peptides S-Ht31 auf die AKAP18δ-CFP-RIIa-YFP-Interaktion in vivo
gezeigt werden. Die Einführung eines Prolins in die RII-Bindungsdomäne von
AKAP18δ-CFP verringerte die FRET-Ratio. Dadurch konnte die RII-Bindungsdomäne
in vivo eingegrenzt werden. Im Hinblick auf die AVP-vermittelten
AQP2-Translokation deuten mehrere Ergebnisse auf eine Beteiligung von AKAP18d
hin. So wird AKAP18δ ebenso wie AQP2 in den IMCD-Zellen in der HS-Fraktion
exprimiert. Auch die stärkere Expression von AKAP18δ in der inneren Medulla im
Vergleich zu dem restlichen Nierengewebe deutet auf eine mögliche Beteiligung
an der AQP2-Translokation hin. Vor allem jedoch zeigt die AVP-induzierte
Abnahme der AKAP18δ-RII-Interaktion, dass AKAP18δ an der AVP-vermittelten
Signalkaskade beteiligt ist.
de
dc.description.abstract
The hormon AVP regulates the water reabsorption in renal collecting duct
principal cells. The binding of AVP to the V2R elevates cAMP levels, resulting
in activation of the PKA. PKA phosphorylates AQP2, thereby inducing its
translocation from intracellular vesicles into the apical membrane,
facilitating water reabsorption. Not only the phosphorylation of AQP2 by PKA
but also the tethering of PKA to subcellular compartments by AKAPs is a
prerequisite for the AQP2-translocation. During the search for AKAPs involved
in the AQP2-translocation, a new splice variant of AKAP18, AKAP18δ, was
identified. AKAP18δ is expressed in IMCD cells. This was shown by Western blot
analyses and by immunoprecipitation with the A18d3. The in vitro AKAP function
was shown in an RII overlay experiment. The in vivo AKAP function was shown by
co-precipitation of AKAP18δ with the RII subunits via cAMP agarose pull down
and by FRET experiments in living cells. In FRET experiments it was also
possible to show the inhibitory effect of the peptide S-Ht31 for the AKAP18δ-
CFP-RIIa-YFP interaction. The introduction of a prolin in to the RII binding
site of AKAP18δ-CFP lead to a decrease in FRET ratio, thereby mapping the RII
binding site in vivo. Several results lead to the hypothesis that AKAP18δ is
involved in the AVP-induced AQP2-translocation. Both, AQP2 and AKAP18δ, are in
the kidney mainly expressed in the inner medulla an in the IMCD cells mainly
in the HS fraction. In cAMP-agarose precipitates from AVP-stimulated IMCD
cells the amount of AKAP18δ was lower than obtained from unstimulated cells.
This result indicates the involvement of AKAP18δ in the AVP-induced signal
pathway. The data provide evidence for an involvement of AKAP18δ in the AVP-
induced AQP2-translocation by anchoring PKA in close proximity to its
substrate AQP2.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject.ddc
500 Naturwissenschaften und Mathematik::570 Biowissenschaften; Biologie::570 Biowissenschaften; Biologie
dc.title
Klonierung und Charakterisierung einer neuen AKAP18-Isoform, AKAP18δ, und ihre
mögliche Beteiligung an der AVP-vermittelten AQP2-Translokation
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. Uli Müller
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. Walter Rosenthal
dc.date.accepted
2004-03-11
dc.date.embargoEnd
2004-04-06
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-2004000859
dc.title.translated
Identification and characterization of a novel A-kinase anchoring protein 18
isoform, AKAP18δ, potentially involved in the vasopressin-induced aquaporin-2
shuttle
en
refubium.affiliation
Biologie, Chemie, Pharmazie
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000001476
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http://www.diss.fu-berlin.de/2004/85/
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open access