Wachstumsfaktoren in Extrakten humaner Hypophysenadenome: Untersuchung von Fraktionierung mittels Festphasenchromatographie und Auswirkungen auf Stimulation und Hemmung der Proliferation von GH3-Zellen, gemessen an 3H- Thymidininkorporation und Hormonsekretion

Abstract

In dieser Arbeit wurden Homogenisate von Hypophysenadenomen nach Seperation im Zellversuch auf stimulierende oder inhibierende Wachstumsfaktoren untersucht. Dabei wurde die Sep-Pak-Trennung als Festphasenchromatographie auf ihre Eignung zur Fraktionierung von Tumorhomogenisaten sowie der Einsatz der Fraktionen im Bio-Assay zum Nachweis inhibierender oder stimulierender Faktoren geprüft. Es konnte gezeigt werden, dass eine Fraktionierung von Proteingemischen mittels ansteigender Acetonitrilkonzentrationen durch Trennung auf einer Sep-Pak-Kartusche möglich ist und die so gewonnenen Fraktionen ohne negative Effekte im Zellversuch eingesetzt werden können. Für Proteinmessungen mittels Bradford-Assay konnte nachgewiesen werden, dass die Entfernung des Lösungsmittels durch Vakuumzentrifugation aufwändigere Schritte ersetzen kann, ohne dass Interferenzen im Assay oder ein Verlust an Probenmaterial eintreten.

This study examined extracts of human pituitary tumors in cell assays for stimulating or inhibiting growth factors after seperation. Sep-Pak- chromotography as reversed solid phase chromatography was examined on its suitability in fractionating homogenisates of tumor tissue. The fractions were tested for effects in cell assays. It was shown, that protein samples can be seperated by chromatography on Sep-Pak-catridge by rising concentration of acetonitrile. The resulting fractions can be used in cell assays without negative effects. It was shown for proteinmeasurment by bradford-assay, that interfering detergents can be removed by vacuumcentrifugation without interaction or loss of specimen.