dc.contributor.author
Schulze Pröbsting, Kristina
dc.date.accessioned
2018-06-07T19:37:57Z
dc.date.available
2007-01-16T00:00:00.649Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/6288
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-10487
dc.description
Deckblatt-Impressum
persönlicher Dank
Inhaltsverzeichnis
Abkürzungsverzeichnis
Einleitung
Literatur
Material und Methoden
Ergebnisse
Diskussion
Zusammenfassung
Summary
Literaturverzeichnis
Anhang
Danksagung
Lebenslauf
Selbständigkeitserklärung
dc.description.abstract
Hodgkin Lymphome gehören zu den häufigsten malignen Erkrankungen des
Immunsystems. Es konnte gezeigt werden, dass Hodgkin/Reed Sternberg (H/RS)
Zellen, die malignen Zellen des Hodgkin Lymphoms, von B-Zellen abstammen. Die
molekulare Pathogenese der H/RS Zellen ist bis heute ungeklärt. Wichtige
Faktoren, die in der Pathogenese dieser Zellen eine Rolle spielen, sind die
permanente Aktivität des Transkriptionsfaktors Nuclear Factor (NF)-kB und das
in mehr als 50 % der H/RS Zellen exprimierte Latente Membranprotein 2A (LMP2A)
des Epstein-Barr Virus. Ziel dieser Arbeit war es, erstmals ein Mausmodell zu
entwickeln, in dem NF-kB permanent aktiv ist und LMP2A-exprimiert wird. Die
Auswirkungen der beiden Faktoren auf die B-Zellen der Mäuse sollten untersucht
werden. Zur Etablierung des Mausmodells wurden modifizierte fötale
hämatopoietische Stammzellen in B-Zell-defiziente Rezipienten transplantiert.
Auf diese Weise konnte man Untersuchungen an Mäusen mit definiert veränderten
B-Zellen durchführen. Die Spender-Stammzellen stammten aus Föten mit einem
knockout des NF-kB-Inhibitors IkB(alpha). Sie wurden vor der Transplantation
mit einem LMP2A-kodierenden Retrovirus infiziert. Als Kontrolle dienten mit
dem LMP2A-Retrovirus infizierte Stammzellen aus Wildtyp-IkB(alpha)-Föten. Die
permanente Aktivität von NF-kB und die Expression von LMP2A konnten bereits
fünf Wochen nach der Transplantation in den hämatopoietischen Zellen der
Rezipienten nachgewiesen werden. So ermöglichte das Modell erstmals in vivo
die Expression von LMP2A und die permanenten Aktivität von NF-kB in
Kombination zu untersuchen. Durchflusszytometrische Analysen belegten einen
verringerten Anteil an B-Zellen in Zellfraktionen mit LMP2A Expression.
Hervorzuheben ist, dass der Anteil an B-Zellen, die B-Zell-Rezeptoren in hoher
Dichte exprimierten (IgM high), innerhalb dieser Zellfraktion niedriger war
als in Fraktionen ohne LMP2A Expression. Als Ursache hierfür kommt die - im
Rahmen dieser Arbeit nachgewiesene - durch LMP2A und permanente NF-kB
Aktivität verminderte Expression der B-zellspezifischen Transkriptionsfaktoren
EBF und Pax5 in Betracht. Deren Verlust führt in knockout Mausmodellen zur
Unterbrechung der B-Zell-Entwicklung im pro-B-Zell-Stadium.
Proliferationsversuche bewiesen eine Hemmung der Proliferation der B-Zellen
durch LMP2A. Diese Hemmung und die mittels RT-PCR Analysen gezeigte
Herunterregulierung von B-Zell-Differenzierungsfaktoren (EBF und Pax5)
spiegeln wider, dass die B-Zellen in ihrer normalen Differenzierung und
Proliferation gestört sind. Die permanente Aktivität von NF-kB forcierte die
Proliferation der B-Zellen nach Stimulation mit B-zellspezifischen
Stimulantien. Diese Zellen profitierten also von Überlebensvorteilen, die sie
gegenüber Zellen mit physiologischer NF-kB Aktivität hatten. Sowohl NF-kB als
auch LMP2A steigerten die Transkription des Rezeptors und
Transkriptionsfaktors Notch1. Es ist bereits belegt, dass dieser Faktor in
H/RS Zellen aktiv ist und proliferative und anti-apoptotische Effekte
aufweist. NF-kB und LMP2A könnten also den Notch1 Signalweg nutzen, um das
Überleben der B-Zellen zu sichern. Im Rahmen dieses Mausmodells konnte gezeigt
werden, dass die permanente Aktivität des Transkriptionsfaktors NF-kB und die
Expression des Epstein-Barr Virus Proteins LMP2A nicht ausreichend sind für
die maligne Transformation von B-Zellen in Milz und Knochenmark. Die
Untersuchungen konnten allerdings demonstrieren, dass beide Faktoren auf
B-Zellen und deren Transformation Auswirkungen haben. NF-kB verstärkt dabei
das Tumorpotential der B-Zellen durch forcierte Proliferation. Beide Faktoren
verringern die Transkription der B-Zell-Differenzierungsfaktoren EBF und Pax5.
de
dc.description.abstract
Hodgkin lymphoma are among the most frequent malignant lymphoid disorders. The
Hodgkin/Reed Sternberg (H/RS) cells, the malignant cells of the lymphoma, are
B cell derived. The molecular pathogenesis of these cells is unknown to date.
Common features of more than 50 % of H/RS cells are the constitutive activity
of the transcription factor Nuclear Factor (NF) -kB und the expression of the
Epstein-Barr virus latent membrane protein 2A (LMP2A). Aim of this study was
to establish a mouse model with constitutively active NF-kB und LMP2A
expression. The effects of these factors on B-cells in mice were
investigated.To establish the model modified fetal haematopoietic stem cells
were transplanted into B cell deficient recipients. The donor haematopoietic
stem cells were extracted from foetuses with a knockout of the NF-kB-inhibitor
IkB(alpha). Before transplantation they were transfected with a retrovirus
encoding for LMP2A. Haematopoietic stem cells that were infected with the
LMP2A retrovirus from wildtype IkB(alpha) foetuses served as controls. Mice
with defined genetic changes in their B cell population were analysed. Five
weeks after transplantation the recipients showed constitutive NF-kB activity
und LMP2A expression in haematopoietic cells. This model enabled us to analyse
effects of permanent NF-kB activity und expression of LMP2A in combination in
vivo. Flowcytometric analysis showed lower fractions of B cells when LMP2A was
expressed. Additionally the fraction of high IgM expressing B cells decreased.
Transcriptional downregulations of B cell specific differentiation factors EBF
und Pax5 could be the reasons for this. In EBF und Pax5 knockout mice B cell
development is blocked in the pro-B cell stage. Additionally, proliferation
assays demonstrated decreased proliferative responses of LMP2A expressing
B-cells to B cell specific stimuli. The inhibition of proliferation und the
down regulation of the transcription of B-cell specific transcription factors
(EBF und Pax5, shown in RT-PCR analysis) revealed deregulated differentiation
und proliferation of the B-cells. Permanent NF-kB activity increased B-cell
proliferation after stimulation. That means it lead to advantages in survival
compared to cells with physiological NF-kB activity. NF-kB as well as LMP2A
increased transcription of the receptor und transcription factor Notch1. It
was already shown that Notch1 is active in H/RS cells und provides
proliferative und antiapoptotic effects. NF-kB und LMP2A might use the Notch1
signalling pathway to protect B-cells from cell death. This mouse model
enabled us to show that permanent NF-kB activity und LMP2A expression are not
sufficient to turn B-cells malignant like H/RS cells. Nevertheless, analysis
demonstrated strong effects on B-cells und their transformation. NF-kB
increases the tumor potentials of B-cells by increasing proliferation. Both
factors decrease transcription of the transcription factors EBF und Pax5.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
Epstein Barr virus
dc.subject
cell membranes
dc.subject
surface proteins
dc.subject
nucleoproteins
dc.subject
transcription factors
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::630 Landwirtschaft::630 Landwirtschaft und verwandte Bereiche
dc.title
Auswirkungen der Expression des Latenten Membranproteins 2A und der
permanenten Aktivität des nukleären Faktors-κB auf die Entwicklung von
B-Zellen in Mäusen
dc.contributor.firstReferee
Univ.-Prof. Dr. Michael F. G. Schmidt
dc.contributor.furtherReferee
Univ.-Prof. Dr. Bernd Dörken
dc.contributor.furtherReferee
Univ.-Prof. Dr. Dieter Ebner
dc.date.accepted
2006-12-31
dc.date.embargoEnd
2007-01-22
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000002695-4
dc.title.translated
Effects of latent membrane protein 2A expression and constitutive nuclear
factor-κB activity on B cell development in mice
en
refubium.affiliation
Veterinärmedizin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000002695
refubium.mycore.transfer
http://www.diss.fu-berlin.de/2007/32/
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000002695
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access