dc.contributor.author
Krueger, Katharina
dc.date.accessioned
2018-06-07T19:13:31Z
dc.date.available
2011-11-02T09:41:02.011Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/5878
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-10077
dc.description.abstract
Im Rahmen der hier vorliegenden Arbeit wurden in Monozyten die antioxidativ
wirkenden Proteine Rhodanese und Superoxiddismutase 1 (SOD1) in Monozyten von
Patienten mit chronischer Niereninsuffizienz untersucht. Die mRNA-Expression
wurde mit quantitativer Real-Time PCR, die Proteinexpression wurde mit
Immunoblotting und quantitativem In-Cell Western Assay bestimmt. Die
Produktion reaktiver Sauerstoff-radikale wurden mittels Fluoreszenz-
Spektrophotometrie untersucht. Die Expressionsstudie zur Rhodanese zeigte bei
dialysepflichtigen Patienten eine signifikant geringere mRNA- und
Proteinexpression im Vergleich zu gesunden Kontrollpersonen. Zudem wiesen
dialysepflichtige Patienten eine deutlich höhere Produktion an reaktiven
Sauerstoffspezies auf. Es konnte gezeigt werden, dass eine verminderte
Rhodanese-Proteinexpression mit erhöhter mitochondrialer Superoxid-produktion
korreliert. Des weiteren konnte festgestellt werden, dass HD-Patienten mit
geringer Rhodaneseexpression eine höhere Mortalitätsrate haben als Patienten
mit hoher Expression an Rhodanese. Für die SOD1-Untersuchung wurden zunächst
von Patienten mit chronischer Niereninsuffizienz und gesunden Kontrollpersonen
zweidimensionale SDS-Gele analysiert. Diese zeigten unterschiedliche
Proteinmuster bei Patienten mit chronischer Niereninsuffizienz und gesunden
Kontrollpersonen. Mittels MS/MS-Massen-spektrometrie konnte SOD1 identifiziert
werden. Durch Immunfärbung der SOD1 konnten Unterschiede in der Expression
zwischen den Gruppen quantifiziert werden. Die Proteinexpression war in HD-
Patienten im Vergleich zu Patienten mit chronischer Niereninsuffizienz und
gesunden Kontrollpersonen signifikant verringert. Dagegen war die
SOD1-Genexpression in HD-Patienten signifikant erhöht, verglichen mit
Patienten mit chronischer Niereninsuffizienz und gesunden Kontrollpersonen.
Des weiteren ergab die Immunfärbung der zweidimensionalen SDS-Gele für die
SOD1 verschiedene Spots, was auf Vorliegen unterschiedlicher SOD1
Proteinspezies schließen lässt. Im Rahmen einer weiteren Untersuchung konnte
die Bedeutung der SOD1 innerhalb der antioxidativen Abwehr dargelegt werden.
Setzt man Monozyten einer erhöhten Glucosekonzentration aus, steigt die
Produktion reaktiver Sauerstoffspezies signifikant an. Setzt man das
SOD1-Mimetikum Tempol zu, wird diese Zunahme blockiert. Diese Untersuchung
ergab Hinweise auf die Bedeutung der SOD1 bei Patienten mit Diabetes mellitus
und diabetischer Nephropathie.
de
dc.description.abstract
Patients with chronic kidney disease (CKD), including dialysis patients (HD),
have a high incidence of premature cardiovascular disease. It is the leading
cause of mortality in these patients. In the present study the antioxidant
emzymes rhodanese and superoxide dismutase 1 were analyzed in monocytes of
patients with CKD. The mRNA expression was determined by quantitative real-
time PCR, the protein expression was determined by Immunoblotting and in-cell
Western assay. Reactive oxygen species were measured by fluorescence
spectrometry. Monocytes of hemodialysis patients showed a significant decrease
in rhodanese protein and mRNA expression compared to healthy subjects. At the
same time they showed an increased whole cell reactive oxygen species
production. Furthermore, the level of mitochondrial superoxide production was
significantly correlated with rhodanese protein expression in monocytes.
Survival of hemodialysis patients was significantly shorter when patients
monocytes expressed a low rhodanese mRNA. The analysis of proteomic profiles
in monocytes of patients with CKD, including HD patients, and control subjects
by two-dimensional electrophoresis (2-DE) indicated differences in spot
pattern. The SOD1 protein, which was identified by MS/MS mass spectrometry and
immunoblotting, was reduced in kidney disease. The characterization of SOD1
protein by in-cell Western assay showed a significant decrease of SOD1 protein
in HD patients compared to CKD patients and healthy subjects. SOD1 gene
expression was significantly higher in HD patients compared to CKD patients,
or control subjects. Furthermore, the immunostaining of 2-DE gel blot
membranes with SOD1 antibody revealed six immunoreactive spots, suggesting the
appearance of different SOD1 protein species. A further study showed the
importance of SOD1 within the antioxidant defence. The incubation of monocytes
with high glucose concentration induced an increase of reactive oxygen species
production. The effect of glucose was blocked by the SOD1 mimetic Tempol.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
oxidative stress
dc.subject
chronic renal failure
dc.subject
superoxide dismutase 1
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Charakterisierung der antioxidativen Enzyme Rhodanese und Superoxiddismutase 1
bei chronischer Niereninsuffizienz
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. med. M. Tepel
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. med. M. van der Giet
dc.contributor.furtherReferee
Priv.-Doz. Dr. med. B. Henning
dc.date.accepted
2011-11-18
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000025081-3
dc.title.translated
Characterization of the antioxidant enzymes rhodanese and superoxide dismutase
1 in chronic renal failure
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000025081
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000009983
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access