Expression der mRNA des Endothelin-konvertierenden Enzyms-1 und des Präproendothelins-1 im murinen Coxsackievirus B 3-Myokarditismodell

Abstract

Einleitung Endothelin-1 (ET-1) ist in die Pathophysiologie von viralen Myokarditiden involviert. Eine Überexpression von ET-1 in Kardiomyozyten führt zu einer Myokarditis. Dabei existieren verschiedene Krankheitsverläufe: von der Ausbildung einer akuten Myokarditis mit vollständiger Ausheilung bis hin zu chronischen Verläufen mit Folgeschäden wie der Herzinsuffizienz. Die Rolle der ECE-1-Isoformen und des Präproendothelins-1 in diesen Verläufen ist unklar. Methoden Vier Wochen alte Mäuse wurden mit dem Coxsackievirus B3 infiziert. Verwendet wurde zum einen C57BL/6, ein Mausmodell welches daraufhin eine akute Myokarditis entwickelt und A.BY/SnJ, die einen chronischen Verlauf der Erkrankung zeigen. Sie wurden 4, 8, 12 oder 28 Tagen nach Infektion getötet. Nicht infizierte Mäuse (Tag 0) dienten als Kontrolle. Die RNA wurde mit Trizol isoliert und in cDNA transkribiert. Die Expression der ECE-1-Isoformen und des Präproendothelins-1 wurde durch real-time PCR analysiert und auf 18S standardisiert. Ergebnisse Die mRNA der ECE-1-Isoformen war zu allen Zeitpunkten nachweisbar. Alle infizierten Tiere entwickelten eine Myokarditis. Die basale Expression (Tag 0) aller vier Isoformen war in C57Bl/6 höher als in A.BY. Zudem zeigten sich Unterschiede im Krankheitsverlauf zwischen den Stämmen. Während in C57Bl/6 nahezu keine Änderung detektierbar war, wiesen A.BY Mäuse ein konstantes ECE-1a bei steigendem ECE-1b und d, geringer auch von Isoform c auf. Diese Hochregulation fand sich in b und d ab Tag vier, c zeigte diese zum Tag 28. Die Expression von präproET-1 verlief in C57Bl/6 unverändert wohingegen A.BY einen Anstieg ab Tag acht aufwies. Aufgrund der geringen Fallzahl waren diese Unterschiede nicht statistisch signifikant nachweisbar. Schlußfolgerung Diese Studie zeigt, dass einzelne ECE-1-Isoformen und präproET-1 Einfluss auf den Verlauf der Myokarditis haben könnten und somit einen möglichen Ansatz für die Behandlung der Myokarditis im Mausmodell darstellen könnten.

Introduction Endothelin-1 (ET-1) is involved in the pathophysiology of viral myocarditis and its expression is upregulated. ET-1 overexpression in cardiomyocytes leads to myocarditis. Different courses are known from the development of an acute disease with complete healing up to the chronification with heart failure. The role of endothelin-converting enzyme-1 isoforms (ECE-1 isoforms) and preproEndothelin-1 (prepro ET-1) in these courses is unknown. Methods and results Four-week-old mice were inoculated with coxsackievirus B3. C57BL/6 mice which develop an acute myocarditis after virus inoculation and A.BY/SnJ mice which develop a chronic myocarditis were used. They were killed on day 4, 8, 12 or 28 post infectionem (p.i.). Uninfected mice served as control on day 0. The RNA was isolated with trizol and transcribed in cDNA and the expression of ECE-1 isoforms and preproET-1 was analyzed by real time PCR and related to 18S RNA. Results mRNA of the ECE-1 isoforms was detectable in all samples. All infected animals developed a myocarditis. The basal expression (day 0) of all four isoforms in C57Bl/6 was in excess of A.BY. There were differences in the course of disease between the lines. C57Bl/6 showed almost barely alteration in contrast to A.BY mice which indicated constant ECE-1a level and increased quantity of ECE-1b and d and less of ECE- 1c. This upregulation occurred in b and d at day four, in isoform c 28 days after virus infection. The expression of preproET-1 in C57Bl/6 was unvaried whereas A.BY showed an upregulation from day eight. Due to small sample sizes observed differences missed statistical significance. Conclusion This study indicates that some of the ECE-1 isoforms and preproET-1 could be correlated with the course of chronic myocarditis and provide new approaches in treatment of murine myocarditis.