Leukozytäres Blutbild und Serumaktivität der Myeloperoxidase während der Puerperalphase bei der Stute

Abstract

Das Ziel dieser klinisch-diagnostischen Studie war die Beurteilung der Aktivität der Myeloperoxidase (MPO) in Verbindung mit dem leukozytären Blutbild während der Puerperalphase bei der Stute sowie die Prüfung der Aussagefähigkeit als diagnostischer Marker für die Besamungstauglichkeit und den daraus resultierenden Trächtigkeitserfolg in der Fohlenrosse. Bei den Probanden handelte es sich um 16 Haflingerstuten mit guter Fruchtbarkeit im Alter von 5 bis 17 Jahren mit Fohlen bei Fuß. Die Stuten lebten unter gleichen Umweltbedingungen. Im Zeitraum von 1 Tag post partum (p.p.) bis 1 Tag nach der letzten Bedeckung wurden täglich Blutproben gezogen. Gleichzeitig wurde bei den in Rosse gekommenen Stuten einmalig direkt vor der ersten Bedeckung ein Uterustupfer zur bakteriologischen und zytologischen Untersuchung gezogen. Alle Stuten wurden von einem von fünf eingesetzten Hengsten mit nachgewiesener Fruchtbarkeit im Natursprung gedeckt. In die Blutauswertung flossen die Absolutwerte der Leukozyten, der neutrophilen Granulozyten und der Lymphozyten sowie das Gesamteiweiß und die MPO ein. Von den 16 Stuten kamen 75 % (n=12) in die Fohlenrosse und wurden auch in dieser gedeckt. Ein Viertel (25 %) der Probandinnen zeigten keine Fohlenrosse (n=4). Der Beginn der Fohlenrosse lag zwischen 5 bis 14 Tagen (9,25±2,49) und die Dauer zwischen 4 und 8 Tagen (6±1,5). Eine relativ früh beginnende Fohlenrosse wies im Schnitt eine längere Rossedauer auf als eine später beginnende. Die aus der Fohlenrosse resultierenden Trächtigkeitsergebnisse lagen mit 58,3 % (n=7) im Mittel der Literaturangaben. Ursächlich könnten hierfür eine ungenügende Uterusinvolution, eine eventuell vorliegende Keimbesiedlung sowie hormonelle Imbalancen genannt werden. Später im Puerperium ovulierende Stuten weisen in der Regel höhere Trächtigkeitsraten auf, als Stuten mit einem Eisprung kurz nach der Geburt. In dieser Studie waren alle Stuten mit einem Fohlenrossebeginn von <8 Tagen nicht tragend (n=3). Als Ursachen werden eine nicht ausreichende Clearance bzw. eine Keimbesiedelung des Uterus vermutet. Die bakteriologischen Untersuchung (BU) ergab nach Anreicherung bei 83,3 % (n=10) der Stuten einen mittel- bis hochgradigen pathogenen Keimnachweis. Die Zytologie zeigte, dass sich alle beprobten Stuten im Östrus befanden. Die Anzahl der neutrophilen Granulozyten im Endometrium lag bei =2 %. Alle BU- negativen (n=2) sowie die Hälfte der BU-positiven (n=5) Stuten waren tragend. Das Vorliegen einer Bakterienflora bzw. einer nicht erfolgreichen Clearance in der Fohlenrosse kann eine verminderte Fertilität zur Folge haben. Die Leukozytenkonzentrationen im Blutbild befanden sich bei fast allen Stuten im Referenzbereich (7,94±1,52 x109/l). Höhere Werte vor und um den Bedeckungszeitraum wiesen Stuten ohne Fohlenrosse (8,62±1,41 x109/l, n=4) sowie nicht tragende (8,36±1,39 x109/l, n=5) gegenüber den tragenden Stuten (7,55±1,19 x109/l, n=7) auf (p<0,05: D-3, D-1, D0, D1). Die neutrophilen Granulozyten lagen bis auf zwei Werte (0,97 und 1,99 x109/l) im Referenzbereich (4,49±1,12 x109/l). Die Werte der Stuten ohne Fohlenrosse (4,82±1,02 x109/l, n=4) waren höher als bei den in der Fohlenrosse gedeckten Stuten (4,38±1,13 x109/l, n=12, p=0,05). Ähnlich der Leukozytenzahl erreichten auch hier die nicht tragenden Stuten höhere Werte (4,86±1,17 x109/l, n=5) als die tragenden (4,22±0,98 x109/l, n=7, p<0,05: D1). Eine erhöhte MPO-Aktivität im Blut war bei den Probandinnen am Tag nach der Geburt (0,97±0,65 U/ml) sowie auch an mehreren Folgetagen im Puerperium und vereinzelt nach Bedeckungen zu finden (D1: 0,99±0,86 U/ml). Stuten ohne Fohlenrosse (n=4) wiesen eine höhere MPO-Aktivität auf (1,26±1,04 U/ml), als jene Stuten, die eine deutliche Fohlenrosse zeigten und sich auch decken ließen (0,62±0,48 U/ml, n=12, p<0,05: D-5, D-4, D-3, D-2, D4). Eine deutlich höhere MPO-Aktivität wurde während des Bedeckungszeitraumes (D-1 bis D7) auch bei den Stuten gemessen, die später nicht tragend waren (0,85±0,59 U/ml, n=5). Tragende Stuten (n=7) wiesen eine MPO-Aktivität von 0,45±0,19 U/ml auf (p<0,05: D1, D3). Ebenso ist ein negativer bakteriologischer Befund durch eine geringere MPO-Aktivität (0,29±0,19 U/ml) gekennzeichnet, wo hingegen ein positiver bakteriologischer Befund eine höhere MPO-Aktivität erkennen lässt (0,65±0,23 U/ml). Tragende Stuten mit einem positiven bakteriologischen Befund (n=5) zeigten eine MPO- Aktivität von 0,50±0,20 U/ml und nicht tragende Stuten (n=5) von 0,79±0,56 U/ml. Hinsichtlich der Trächtigkeitsrate hat diese Arbeit trotz sehr kleiner Versuchsgruppe im Ansatz als Trend gezeigt, dass Stuten mit einer höheren MPO- Aktivität keine Fohlenrosse zeigten bzw. eher nicht tragend wurden und Stuten mit einer geringeren MPO-Aktivität leichter konzipierten. Ob die Myeloperoxidase einen Marker für die Besamungstauglichkeit in der Fohlenrosse, vor allem unter Berücksichtigung eines positiven bakteriologischen Befundes, darstellt, wäre interessant in weiteren Studien mit wesentlich größeren Probandenzahlen sowie ein größeres Zuchtgebiet umfassende Studienpopulationen zu überprüfen

The purpose of this clinical-diagnostic study was the evaluation of the serum myeloperoxidase (MPO) activity in conjunction with the white blood cell count (WBCC) during the puerperium of the mare as well as the assessment of the reliability as a diagnostic marker for the breeding soundness and the subsequent pregnancy rate in the foal heat. Sixteen Haflinger mares from 5 to 17 years of age were included in the study. All of them were in good breeding condition living in the same stud. Blood samples were collected daily starting the first day post partum until the day after the last breeding. A uterine swab for bacteriological and cytological examination was collected from the mares in heat once before the first breeding. All mares were bred naturally to five different stallions, which all fulfilled the fertility requirements according to the test results. The absolute values of the WBC, neutrophils, lymphocytes and total serum protein were used for the analysis of the blood samples. Of the 16 mares 75 % (n=12) showed signs of foal heat and were bred whereas in 25 % (n=4) no foal heat was observed. The onset of the foal heat ranged from 5 to 14 days (9,25±2,49) post partum and the duration varied from 4 to 8 days with an overall average of 6±1,5 days. An early onset was followed by a longer duration in comparison to the later starting foal heats. The pregnancy rate achieved by using the first heat post partum (58,3 %, n=7) was in accordance with the results published by other authors, due to inadequate uterine involution, bacterial contamination and hormonal imbalances. The pregnancy rates of the mares showing a later post partum ovulation were higher than the ones achieved by the mares ovulating sooner presumably. During this study, all mares which displayed signs of the foal heat before day 8 post partum failed to conceive (n=3). A presumptive cause for this observation is thought to be an inadequate clearance and subsequent bacterial colonization of the uterus. The results of the bacteriological examination of the uterine swabs (after enrichment) showed a moderate to high detection of pathogenic germs in 83,3 % (n=10). Uterine cytology confirmed all mares to be in oestrus. The number of neutrophils within the endometrium was =2 %. All of the mares with swabs negative in the bacteriological examination (n=2) and half of the ones with positive results (n=5) were in foal. Insufficient uterine clearance and a bacterial contamination during foal heat may result in a diminished fertility. The leucocyte count of almost all mares was within the normal reference value (7,94±1,52 x109/l). Mares without a foal heat (8,62±1,41 x109/l, n=4) tended to have higher WBC values before and during breeding as well as the non-pregnant (8,36±1,39 x109/l, n=5) in comparison to the pregnant mares (7,55±1,19 x109/l, n=7, p<0,05: D-3, D-1, D0, D1). Except for two test results (0,97 and 1,99 x109/l), the measured neutrophil counts were within the normal reference value (4,49±1,12 x109/l). The values of mares not in foal heat (4,82±1,02 x109/l, n=4) were higher than the ones of mares which were bred during foal heat (4,38±1,13 x109/l, n=12, p=0,05). Again, non-pregnant mares displayed higher values (4,86±1,17 x109/l, n=5) than pregnant mares (4,22±0,98 x109/l, n=7, p<0,05: D1). An increased MPO-activity in the blood was measured on the first day post partum (0,97±0,65 U/ml) as well as on several consecutive days during the puerperium and sporadic after breeding (D1: 0,99±0,86 U/ml). Mares without foal heat (n=4) seem to have higher MPO- activity (1,26±1,04 U/ml) than the ones with distinct signs of foal heat (0,62±0,48 U/ml, n=12, p<0,05: D-5, D-4, D-3, D-2, D4). During the time of breeding (D-1 till D7), a significantly increased MPO-activity was also measured in mares, which failed to conceive (0,85±0,59 U/ml, n=5). Mares in foal (n=7) measured an average MPO-activity of 0,45±0,19 U/ml (p<0,05: D1, D3). Additionally, a negative bacteriological examination was related to lower MPO-activity (0,29±0,19 U/ml), whereas a positive bacteriological examination showed a higher MPO-activity level (0,65±0,23 U/ml). Mares in foal with a positive bacteriological examination (n=5) measured an average MPO-activity of 0,50±0,20 U/ml and non-pregnant mares (n=5) measured a level of 0,79±0,56 U/ml. Despite the small number of test animals, the present study shows first evidence that high MPO-activity caused a higher rate of non-pregnancy and an absence of foal heat, whereas mares with lower values tended to conceive more frequently. The significance of myeloperoxidase serving as a reliable marker for breeding soundness during foal heat especially with a concurrent positive bacteriological uterine swab has to be confirmed in further prospective studies with both, a considerably higher number of mares and a larger breeding area with more representative breeding mare population.