Untersuchungen zur pathogenetischen Funktion des Oberflächenmarkers PDL2 für das PMBL unter Verwendung des retroviralen Gentransfers

Abstract

Für das primäre mediastinale B-Zell-Lymphom (PMBL) konnte mit Hilfe von Genchipanalysen ein spezifisches Genexpressionsprofil ermittelt werden. Hierbei wurde für das Molekül PDL2 eine stark erhöhte Expression nachgewiesen. Für PDL2 ist ein negativer regulatorischer Effekt auf die T-Zellfunktion beschrieben. Diesen könnten Tumorzellen nutzen, um einer tumorspezifischen T-Zellantwort Tumor-infiltrierender T-Zellen (T-TILs) zu entgehen. Ob PDL2-exprimierende PMBL-Zellen in den Zellzyklus von T-TILs eingreifen können und möglicherweise Apoptose oder Zellzyklusarrest in T-TILs induzieren, wurde noch nicht erforscht. In der vorliegenden Arbeit wurden Retroviren mit dem Zielgen PDL2 zur Transduktion von primären B-Lymphomzellen hergestellt. Die transduzierten Lymphomzellen wurden in vitro und in vivo in Maus- Transfermodellen erforscht. Im Rahmen der vorliegenden Dissertation konnten mit den retroviralen Konstrukten pMSCV-2.2-IRES-GFP (Leervektor „mock“) und pMSCV-2.2-IRES-GFP-PDL2 retrovirale Überstände mit Hilfe der Verpackungszelllinie Plat-E gewonnen werden. Mit diesen wurden primäre Eμ-myc- Lymphomzellen erfolgreich und reproduzierbar transduziert. Die spezifische Überexpression von PDL2 und GFP in den transduzierten Zellen wurde im FACS nachgewiesen. In vitro wurde gezeigt, dass PDL2 hemmend auf die Proliferation antigenspezifischer T-Zellen wirkt. Die in vivo Versuche zeigten, dass das Eμ- myc-Tumormodell aufgrund der hohen Teilungsrate der Eμ-myc-Lymphomzellen ungeeignet ist, um einen durch PDL2 induzierten negativen regulatorischen Effekt oder eine Apoptoseinduktion in T-TILs nachweisen zu können. Die hier dargestellten vielversprechenden Ergebnisse der in vitro Versuche könnten für eine mögliche Entwicklung therapeutisch einsetzbarer Inhibitoren relevant sein.

Applying gene-array analysis a specific gene expression profile for the primary mediastinal B-cell lymphoma (PMBL) could be determined. It shows an increased gene expression for the molecule „programmed death receptor ligand 2“ (PDL2). PDL2 is known as a negative regulator of T-cell function. This negative regulatory function could be used by tumor cells to escape from a tumor-specific T-cell response by tumor infiltrating T-cells (T-TILs). It has remained enigmatic whether PDL2-expressing PMBL-cells influence the cell cycle of T-TILs and induce apoptosis or cell cycle arrest. In the present thesis a retrovirus encoding the target gene PDL2 was raised and used to transduce primary Eµ-Myc B-lymphoma cells. Such transduced lymphoma cells were investigated in vitro and in mouse transfer models. As part of this thesis retroviral supernatant was obtained with the retroviral constructs pMSCV-2.2 -IRES-GFP (empty vector "mock") and pMSCV-2.2-IRES-GFP-PDL2 using the packaging cell line Plat-E. With the retroviral supernatant primary Eµ-Myc lymphoma cells were transduced successfully and reproducibly. The specific overexpression of green fluorescent protein (GFP) and PDL2 in the transduced cells was detected by flow cytometry analysis. In vitro it could be shown that PDL2 has an inhibitory effect on the proliferation of antigen-specific T-cells. However, in vivo experiments revealed that the Eµ-Myc tumor model is not optimized due to the high rate of lymphoma cell division in order to prove an inhibitory impact on T-cell activation or even an apoptosis induction in T-TILs by PDL2. Taken together, the results obtained from in vitro experiments could be indicative for the usefulness of therapeutic inhibitors targeted at PDL2.