Untersuchungen zum Einfluss von Zinkfinger-Protein 580 auf die LPS-induzierte Interleukin-6-Produktion in Monozyten

Abstract

Einleitung: Zinkfingerprotein 580 (ZNF580) ist an der Expressionsregulation verschiedener Zielgene und dadurch an der Modulation von Angiogenese und Endothelzellfunktionen beteiligt. Über seine Funktion bei entzündlichen Prozessen ist bislang wenig bekannt. Ziel dieser Arbeit war die Überprüfung der Hypothese, dass ZNF580 an der Regulation von Entzündungsprozessen beteiligt ist. Methoden: MonoMac6 wurden mit LPS, TNF-α oder fMLP stimuliert. Zum Nachweis und zur intrazellulären Lokalisation von ZNF580 wurden die Zellen nach Färbung im Fluoreszenzmikroskop analysiert. Die Expression von ZNF580, IL-1, IL-6 und IL-8 wurde nach reverser Transkription der mRNA mittels quantitativer real-time PCR gemessen. Zur Quantifizierung von Proteinen wurden Zelllysate mittels Immunoblotting sowie Zellkulturüberstande mittels ELISA analysiert. Zum „Knockdown“ von ZNF580 wurde ZNF580-spezifische siRNA verwendet. Ergebnisse: ZNF580 ist in MonoMac6 exprimiert und im Nukleus lokalisiert. Nach 24 h Stimulation mit LPS war die ZNF580-Expression erhöht, während TNF-α und fMLP unter diesen Bedingungen keinen Effekt zeigten. Zudem gab es nach LPS-Stimulation eine Dosis-abhängige, negative Korrelation zwischen ZNF580 und IL-6. Dementsprechend war nach „Knockdown“ von ZNF580 mit spezifischer siRNA die LPS-abhängige IL-6-Produktion erhöht. Im Zeitgang der LPS-Stimulation war ZNF580 auf Proteinebene nach 2 h bis 8 h moderat erhöht und nach 16 h drastisch reduziert. Diese Reduktion fiel mit der zweiten Phase der prolongierten IL-6-Produktion zusammen. Schlussfolgerung: In dieser Studie konnte gezeigt werden, dass ZNF580 in MonoMac6 exprimiert wird und an der LPS- induzierten IL-6-Produktion beteiligt ist. Somit scheint ZNF580 ein neuer Akteur bei der Regulation von Entzündungsreaktionen von Monozyten zu sein.

Introduction: Zinc finger protein 580 (ZNF580) is a nuclear-located factor, probably affecting gene expression control. It is involved in the modulation of angiogenesis and endothelial function. Little is known about a role of ZNF580 in inflammation. The aim of this study was to determine how ZNF580 contributes to the regulation of inflammatory processes. Methods: MonoMac6 were stimulated with LPS, TNF-α or fMLP. The cells were analysed with a fluorescence microscope for detection and intracellular localisation of ZNF580. Expression of ZNF580, IL-1, IL-6 and IL-8 was quantified after reverse transcription of mRNA via quantitative real-time PCR. For quantification of protein cell lysates were analysed via immunoblotting and cell culture supernatants via ELISA. Specific siRNA was used to knock out ZNF580 gene. Results: ZNF580 is expressed in MonoMac6 and located in the nucleus. Its expression was increased after 24 h of LPS stimulation, whereas TNF-α and fMLP had no effect under these conditions. There was a dose-dependent negative correlation between ZNF580 and IL-6. siRNA mediated knockdown led to an increased IL-6 production after LPS stimulation in MonoMac6. The time course of LPS stimulation showed ZNF580 to be moderatly increased after 2 h up to 8 h, followed by a sharp decline after 16 h. This late decline of ZNF580 coincided with the second phase of the prolongated IL-6 production. Conclusion: This study showed, that ZNF580 is expressed in MonoMac6 and involved in the LPS-induced IL-6 production. Thus ZNF580 seems to be a novel player in the regulation of inflammatory reactions of monocytes.