dc.contributor.author
Hanisch, Carlos
dc.date.accessioned
2018-06-07T17:27:04Z
dc.date.available
2017-01-30T09:40:05.891Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/3850
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-8050
dc.description.abstract
TFF3 wird bei mucosalen Verletzungen, unterschiedlichen ulcerativen Prozessen
und Krebs vermehrt exprimiert und scheint vor allem bei der Abwehr,
Instandhaltung und Reparatur des intestinalen Epithels eine Relevanz zu
besitzen. Die Überexpression von TFF3 in HT-29/B6 führte in dieser Arbeit zu
einem erhöhten protektiven Effekt gegenüber einer IFN-γ- und TNF‑α-
induzierten Apoptose. Um diesen Effekt zu verstehen, haben wir
unterschiedliche miRNAs und lncRNAs als potente Regulatoren untersucht, die
laut Literaturrecherchen und in silico-Analysen eng im Zusammenhang mit
TFF3-relevanten Signalwegen wie Wnt, PI3K und der Regulation der Apoptose
stehen. Dabei stießen wir auf die antikorreliert exprimierte miR-491-5p und
lncRNA PRINS. Gain- und loss of function-Experimente wiesen auf eine
gegenseitige Regulation hin, wobei die direkte Interaktion von uns bewiesen
werden konnte. Es drängte sich die Vermutung auf, dass der erhöhte
antiapoptotische Effekt von TFF3 auf die Dysregulation und das Zusammenspiel
der miR-491-5p und PRINS zurückzuführen sein könnte. Ein Ausgleich dieser
veränderten Expression auf das Niveau von Kontrollzellen sollte unserer
Hypothese nach auch den Schutz gegenüber der Induktion der Apoptose aufheben.
Tatsächlich konnte der Anteil apoptotischer HT-29/B67/htff3 dadurch erhöht
werden. Um den Mechanismus hinter der Wirkung beider nicht kodierenden RNAs zu
untersuchen, wurden mittels kleiner inhibitorischer Moleküle verschiedene
relevante Signalwege stillgelegt, wodurch die Bedeutung des PI3K-Signalweges
erkennbar wurde. Die Inhibierung des PI3K-Signalweges führte zur Aufhebung der
TFF3-vermittelten Dysregulation beider nicht kodierenden RNAs. Dabei scheinen
TFF3 und miR-491-5p unabhängig von AKT in der Lage zu sein, PDK1 zu
phosphorylieren und p70-S6K zu aktivieren. Die erhöhte Phosphorylierung der
p70-S6K unabhängig von PDK1 in HT-29/B67/mock und die Untersuchung pro- und
anti-apoptotisch wirkender Proteine führten uns zu PMAIP1, einem Regulator des
pro-apoptotischen Bcl-2-Familienmitgliedes Mcl-1, der bekanntermaßen sogar in
der Lage ist, Apoptose in Krebszellen auszulösen. Co-Lokalisierungen von PRINS
und PMAIP1 bekräftigten die Hypothese einer potentiell gegenseitigen
Regulation. Unseren Ergebnissen nach scheint TFF3 in der Lage zu sein, die
Translokation von PMAIP1 vom Zellkern in das Zytoplasma PRINS-abhängig
verhindern zu können. Final durchgeführte Co-Immunpräzipitationen deuteten auf
eine direkte Bindung von PMAIP1 und PRINS hin. Weitere mechanistische
Untersuchungen wären in Zukunft notwendig, um den genauen Einfluss von PRINS
auf PMAIP1 entschlüsseln zu können. Besonders interessant wäre zusätzlich die
Überprüfung des protektiven PRINS-Effektes in vivo als potentielles
Therapeutikum bei der IBD, als Marker bei metastasierenden Krebserkrankungen
oder zusätzliches Ziel im Rahmen einer TRAIL-basierten Chemotherapie.
de
dc.description.abstract
TFF3 is upregulated in mucosal injury, different ulcerative processes and
cancer. It appears to have a relevance especially in the defense, maintenance
and repair of the intestinal epithelium and is also closely related to tumor
invasion, resistance to apoptosis and metastasis. The over-expression of TFF3
in HT-29/B6 resulted in an increased protective effect against IFN-γ and TNF-α
induced apoptosis and caused dysregulation of various non-coding RNAs. Anti-
correlated expression pattern after transfection with miR-491-5p-mimic as well
as reporter gene assays confirmed the direct interaction of miR-491-5p with
the lncRNA PRINS in HT-29/B6/htff3. miR-491-5p was shown to inhibit PRINS-
expression while PRINS had no discernible effect on miR-491-5p. Moreover,
PRINS expression seemed to be controlled independently of TFF3 and miR-491-5p
by IFN-γ- and TNF-α. Both non-coding RNAs hold an impact on the previously
observed antiapoptotic phenotype. Compensation of the dysregulated noncoding
RNAs increased the number of apoptotic cells after TRAIL-induced apoptosis.
Mechanistically, Western blot analyzes confirmed the involvement of PI3K
signaling pathway in this context. Regulation of miR-491-5p and PRINS by
IFN-γ/TNF-α seemed to activate the PI3K signaling pathway independent of AKT
through regulation of PDK1 and p70-S6K. In addition, the TFF3-mediated
inhibitory effect on miR-491-5p was reversible by inhibition of the PI3K
signaling pathway with small molecular inhibitors. PRINS and miR-491-5p had an
impact on expression of a variety of mRNA that encode for pro-or anti-
apoptotic proteins and the regulation of PMAIP1, FOXK1 and FOXK2 was confirmed
at protein level, too. In further analyzes PRINS and PMAIP1 showed nuclear
colocalization, indicating a direct interaction. PRINS revealed its influence
on PMAIP1’s cellular localization in the nucleus especially in combination
with TRAIL-induced apoptosis. PRINS seemed to be able to prevent the
translocation of PMAIP1 from the nucleus to the cytoplasm. Finally, co-
immunoprecipitation suggested PMAIP1’s direct binding on PRINS. In future,
further mechanistic studies will be necessary in order to determine the impact
of PRINS on regulation of PMAIP1. Analyzes under in vivo conditions will be
indicated to prove the potential of PRINS as a therapeutic target in IBD, as a
marker in metastatic cancers or as part of a TRAIL-based chemotherapy.
en
dc.format.extent
III, 126 Seiten
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
long non coding RNA
dc.subject.ddc
500 Naturwissenschaften und Mathematik::570 Biowissenschaften; Biologie::570 Biowissenschaften; Biologie
dc.title
TFF3 vermittelt seinen anti-apoptotischen Effekt über eine miR-491-5p
abhängige Regulation von PRINS in HT-29/B6-Zellen.
dc.contributor.contact
carlos_hanisch@hotmail.com
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. Dr. Ralf Einspanier
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. Tina Romeis
dc.date.accepted
2016-11-03
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000103945-5
dc.title.translated
TFF3-dependent antiapoptotic effect is mediated by a miR-491-5p-PRINS-axis in
human colorectal adenocarcinoma cells HT-29/B6.
en
refubium.affiliation
Biologie, Chemie, Pharmazie
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000103945
refubium.note.author
Diese Arbeit wurde von der H. Wilhelm Schaumann Stiftung unterstützt.
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000020900
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access