Gegenstand und Ziel der vorliegenden Arbeit bestanden darin, die am häufigsten in Europa vorkommenden Bandwurmarten des Pferdes Anoplocephala perfoliata und Paranoplocephala mamillana mit Hilfe der PCR zu differenzieren und neue spezifische Primer für diese zu entwickeln. Ausgehend von Proglottiden der beiden Bandwurm-Spezies wurde mit den plathelminthenspezifischen Cytochrom-C Oxidase I Primern (COI-Primer) ein Abschnitt der mitochondrialen DNA amplifiziert. Nach Sequenzierung wurden aus den jeweiligen Amplifikaten beider Spezies diskriminierende Primer konstruiert. Für die am häufigsten vorkommenden Bandwurmarten des Pferdes konnten spezies-spezifische Primer synthetisiert werden (AP-Primer und PM-Primer). Diese erlangten in den durchgeführten Versuchen eine analytische Spezifität von 100 %. Mit einer Verdünnungsreihe wurde die analytische Sensitivität beider Primerpaare bestimmt. Sie ergab für den Anoplocephala perfoliata-Primer (AP 72L/341R) eine Nachweisgrenze von ca. 12,5 pg DNA und für den Paranoplocephala mamillana- Primer (PM 26L/346R) eine Nachweisgrenze von ca.1,65 pg DNA. Durch den Einsatz von AP- und PM-Primern war es nur einmalig möglich, Bandwurm DNA in experimentell infizierten Pferdekotproben nachzuweisen. Die hierbei aufgetretenen Probleme wurden in der vorliegenden Arbeit diskutiert. Weiterführende Untersuchungen sind geplant.
Objective and intention of this thesis were the differentiation of Europes most widely spread horse cestodes species Anoplocephala perfoliata and Paranoplocephala mamillana by means of PCR and the development of new primers. Based on proglottides of both cestodes species, a sequence of the mitochondrial DNA was amplified by platyhelminthes specific cytochrome c oxidase subunit I primer (COI primer). After sequencing, discriminate primers were constructed based on the amplifications of both species. For the most frequent horse cestodes species, species specific primers could be synthesised (AP-primer and PM-primer). In the tests run in this study, these primers attained an analytic specificity of 100 %. By means of continuing dilution, the analytical sensitivity of both primer-pairs were determined. The Anoplocephala perfoliata-Primer (AP 72L/341R) showed a detection sensitivity of approximately 12,5 pg DNA and for the Paranoplocephala mamillana-Primer (PM 26L/346R) a detection sensitivity of approximately 1,65 pg DNA was determined. The use of AP-primer and PM-primer allowed to furnish proof of cestodes-DNA in faecal samples from experimental infected horses just once. The problems associated with our tests are discussed in this thesis. Further tests are intended.
