Immunhistochemische Untersuchungen zum Zytokeratinmuster epithelialer Zellen der Haut des Huhnes

Abstract

Grundstrukturen des Zytoskeletts aller Epithelzellen sind die Zytokeratine (CK). Um das Zytokeratinmuster gesunder Hühnerhaut zu charakterisieren, wurde das Reaktionsvermögen einer breiten Palette von kommerziell verfügbaren monoklonalen Zytokeratinantikörpern immunhistologisch geprüft. In Vorversuchen wurden zunächst 12 monoklonale Zytokeratinantikörper (mAK) an formalinfixiertem und paraffiniertem Hautprobenmaterial von vier Masthühnern der 5. Lebenswoche (LW) mit Hilfe eines Biotin-Strepavidin- (B-SA-) Testkits auf ein Markierungsvermögen hin untersucht. Dabei reagierten nur die Antikörper AE 1, AE 3, LP 34 und LL 002 mit einem positiven Ergebnis in Teilen der aviären Epidermis. In der anschließenden Hauptuntersuchung wurden diese vier positiv reagierenden Antikörper am Hautmaterial von 24 Legehühnern und 24 Masthühnern unterschiedlicher Altersstufen (18. ET, 1. LT, 5. LW, 11. LW, 15. LW und 22. LW) getestet. Dabei wurden in jeder Alterstufe jeweils sechs definierte Hautstellen (Pars pectoralis des Apterium ventrale, Pars pectoralis der Pteryla ventralis und Pars cruralis der Pteryla membri pelvici, Scuta/Scutella der Podotheca, Crista carnosa, Pulvinus metatarsalis) untersucht und verglichen. Im Ergebnis visualisierten die Antikörper AE 1 und AE 3 in der Haut die basale und suprabasale Epidermis sowie die innere Scheide der Federfollikel. Mit LP 34 wurde allein die innere Scheide der Federfollikel und die suprabasale Schuppenhaut der Podotheca und des Pulvinus metatarsalis markiert. Der monospezifische Zytokeratinmarker LL002 färbte nur Hornanteile an und wurde damit im Gegensatz zu den anderen positiv reagierenden mAK als wenig spezifisch eingestuft. Im Vergleich der einzelnen Altersgruppen erbrachte allein der Antikörper AE 1 spezifische Ergebnisse. Im Vergleich der verschiedenen Hautregionen zeigte dagegen nur LP 34 ein spezifisches Markierungsvermögen. Letztlich kann das Markierungsverhalten der positiv reagierenden mAK auf das Vorliegen bestimmter Zytokeratine in der aviären Epidermis verweisen. So kann ein regelmäßiges Vorkommen der sogenannten �Hyperproliferationskeratine� CK 6 und CK 16 in gesunder Hühnerepidermis als stabilisierende Komponenten angenommen werden, die so beim Säuger nicht exprimiert werden.

Cytokeratins (CK�s) are a major component of the cytoskeleton in all epithelial cells. To determine the expression pattern in normal chicken skin, the reactivity from a broad range of commercially available monoclonal antibodies were studied using a immunohistochemical method. In preliminary examinations the application of 12 monoclonal antibodies to normal skin sections from four 5-week-old meat-type chickens was assessed. The panel of monoclonal antibodies were employed as primary antibodies using a biotin- steptavidin (B-SA) detection system on formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. The avian epidermis only reacted positively with four antibodies: AE 1, AE 3, LP 34 and LL 002. In the main examination which followed the four positive antibodies were tested in skin samples obtained from 24 layer-type and 24 meat-type chickens in six different age groups (18th embryonic day, 1st day after hatching, 5th, 11th, 15th and 22 weeks after hatching). Within these age groups, a selection of six skin regions (pars pectoralis of apterium ventrale, pars pectoralis of pteryla ventralis and pars cruralis of pteryla membri pelvici, metatarsus, crista carnosa and pulvinus metatarsalis) were examined and compared. As a result, the antibodies AE 1 and AE 3 stained the basal cell layer and the suprabasal cell layers in the epidermis and the inner sheath cells of feather. LP 34 antibody marked the epidermis in suprabasal cell layers from scutate and reticulate scales and in inner sheath cells of feather. The antibody LL 002 stained only cells from stratum corneum formation. The exclusive reactions in horny layers are the reason for the assumption that LL 002 is more non-specific than other positive antibodies. In separate age groups, only AE 1 was marked specificly. An influence of skin region only was found with LP 34. The results of positive antibodies suggested the prevalence of certain cytokeratins in chicken epidermis. In contrast to mammals, the expression of CK 6 and CK 16 suggests the prevalence of the so- called �hyperproliferation keratins� in normal chicken skin, which stabilize the thin chicken skin.