dc.contributor.author
Klühs, Christine
dc.date.accessioned
2018-06-07T17:03:32Z
dc.date.available
2008-10-21T07:29:38.377Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/3342
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-7542
dc.description.abstract
Die CML ist eine klonale Neoplasie der Hämatopoese, für die eine spezifische
Chromosomen-Anomalie, das Philadelphia-Chromosom, charakteristisch ist. Das
Philadelphia-Chromosom bildet durch reziproke Translokation der Chromosomen 9
und 22, t(9;22)(q34;q11), das BCR-ABL-Gen, durch welches das Fusionsprotein
p210^BCR-ABL generiert wird. p210^BCR-ABL hat eine erhöhte und deregulierte
Tyrosinkinaseaktivität, die zu gesteigerter Proliferation, reduziertem
natürlichen Zelltod und verminderter Adhäsion der leukämischen Zellen am
Knochenmarkstroma führt. Imatinib, ein 2-Phenylaminopyrimidinderivat,
inhibiert selektiv die BCR-ABL-Tyrosinkinase, indem es kompetitiv die ATP-
Bindungsstelle der Tyrosinkinase bindet. Der Tyrosinkinaseinhibitor verursacht
dadurch in BCR-ABL+ Zellen einen Proliferationsstopp und die Reinduktion des
programmierten Zelltodes. Die neuesten Daten der IRIS-Studie zeigen nach einer
Beobachtungszeit von 60 Monaten zytogenetische Ansprechraten von 92% im Sinne
eines MCR und von 87% mit CCR. Die herausragenden Remissionsraten haben die
Prognose und das Therapiemanagement von CML-Patienten entscheidend
beeinflusst. Dennoch können Resistenzen gegenüber Imatinib zum Rezidiv der
Erkrankung führen. Die vorliegende Promotionsarbeit beschäftigt sich mit den
therapeutischen Möglichkeiten, die sich durch Imatinib in Verbindung mit
autoHSCT ergeben könnten. Dazu wurden im Zeitraum von 3 Jahren 18 CML-
Patienten mit CCR über mehr als 6 Monate zur Separation CD34+ Zellen mit
Filgrastim mobilisiert, ohne dabei die Therapie mit Imatinib zu unterbrechen.
Während der Therapie und Mobilisation wurden sowohl Blut- und
Knochenmarksproben als auch die Stammzellapheresate zytogenetisch und
molekulargenetisch untersucht. Es wurden 8 Frauen und 10 Männer analysiert. 15
Patienten befanden sich initial in CP, 3 Patienten in AP. Die mittlere
Erkrankungsdauer vor autoHSCT betrug 40,6 Monate (Range: 8-91 Monate), die
mittlere Dauer der Imatinibtherapie bis zur Separation 16,2 Monate (Range:
6-27 Monate). Patienten in CP erhielten täglich 400 mg Imatinib, Patienten in
AP 600 mg. Die Mobilisation erfolgte mit 2-mal täglich 5 µg/kg KG Filgrastim
s.c. unter kontinuierlicher Imatinibtherapie. Mindestens 2,0x10^6/kg KG CD34+
Zellen wurden als erfolgreiche Apherese definiert. Die mittlere Anzahl
peripherer CD34+ Zellen nach Mobilisation lag bei 2,8x10^6/kg KG (Range:
0,7-4,9x10^6/kg KG). Bei 2 Patienten erfolgte aufgrund einer zu geringen
Anzahl der im peripheren Blut zirkulierenden CD34+ Zellen keine
Stammzellsammlung. Bei 4 Patienten wurden weniger als 2,0x10^6/kg KG CD34+
Zellen gesammelt. Erfolgreich verlief die Apherese bei 12 Patienten (67%).
Durchschnittlich konnten 3,2 x10^6/kg KG CD34+ Zellen (Range: 2,0-4,9x10^6/kg
KG) gesammelt werden. 21 Proben der Apheresate von insgesamt 14 Patienten
wurden molekulargenetisch analysiert. In der quantitativen PCR waren alle
Proben BCR-ABL-negativ. Die qualitative konventionelle PCR war bis auf eine
Probe ebenso BCR-ABL-negativ. 12 Proben (57%) waren auch in der nested PCR
BCR-ABL-negativ. Insgesamt konnten von 7 Patienten BCR-ABL-negative CD34+
Zellen gesammelt werden. Der Vergleich der BCR-ABL-Ratio der Blut- und
Knochenmarkproben vor und 1-2 Monate nach SCM zeigte keine statistisch
signifikante Änderung im Wilcoxon-Test. Die Ergebnisse der qualitativen PCR
waren bei 12 Patienten unverändert. Bei 2 Patienten zeigte sich eine Zunahme
der BCR-ABL-PCR-Produkte, bei 2 Patienten war die nested PCR nach SCM BCR-ABL-
negativ. Die vorliegende Arbeit demonstriert die Sicherheit und Effizienz
autologer Stammzellsammlungen unter Imatinibtherapie bei CML-Patienten in CCR.
Es konnten bei 12 Patienten erfolgreich Stammzellapheresate gesammelt werden.
Bei 7 Patienten waren diese sogar BCR-ABL-negativ, was für ein erfolgreiches
In-vivo-Purging sprechen könnte. Das Auftreten von durch Resistenzen bedingten
Rezidiven erfordert die weitere frühzeitige Therapieoptimierung. Autologe
Stammzellsammlungen und –transplantation könnten eine alternative,
vorübergehende Therapieoption beim Auftreten von Rezidiven darstellen.
de
dc.description.abstract
CML is characterized by the presence of the oncogenic t(9;22)(q34;q11)
translocation known as the Philadelphia chromosome that generates the BCR-ABL
fusion protein. Imatinib is a 2-phenylpyrimidine derivative that induces a
complete cytogenetic response in 87% of patients with newly diagnosed
Philadelphia chromosome positive CML by competitively blocking the ATP binding
cleft of the BCR-ABL fusion protein. The notably high rate of complete
cytogenetic responses has influenced the prognosis and management of CML
patients. However, resistance to imatinib can cause relapse. The aim of this
project was to reevaluate the place of autologous SCT in the imatinib era. To
assess the possibility of stem cell mobilisation (SCM) during imatinib therapy
G-CSF-induced SCM and subsequent leukapheresis were performed in 18 CML
patients in CCR. During imatinib therapy and SCM peripheral blood, bone marrow
and apheresis products were analysed by nested and quantitative RT-PCR and by
fluorescence in situ hybridization (FISH). A total of 18 patients were
investigated, 15 patients in chronic phase and three patients in accelerated
phase. The male to female ratio was 10:8. The mean duration of CML before SCM
was 40.6 months (range: 8-91 months) and the mean duration of imatinib therapy
was 16.2 months (range: 6-27 months). In all patients a complete cytogenetic
response was confirmed twice in consecutive cytogenetic analyses. Subsequently
all patients were stimulated with 10 µg/kg BW G-CSF and continued imatinib
therapy (400 mg imatinib daily in chronic phase patients and 600 mg imatinib
daily in accelerated phase patients). A successful separation of ≥ 2.0x10^6/kg
BW CD34+ cells could be achieved in 12 patients (67%) with a mean yield of 3.2
x10^6/kg BW CD34+ cells (range: 2.0-4.9x10^6/kg BW). The mean yield of CD34+
cells after a median of five days of G-CSF administration was 2.8x10^6/kg BW
(range: 0.7-4.9x10^6/kg BW). Apheresis generated insufficient amounts in four
patients with a harvest of <2.0x10^6 CD34+ cells/kg BW. The circulating CD34+
cells were <5/µl in two patients indicating unsuccessful mobilisation. 21 stem
cell products from 14 patients were analysed by quantitative and qualitative
PCR. All harvests were BCR-ABL-negative in quantitative RT-PCR. After first
round qualitative RT-PCR, all but one stem cell products, were also BCR-ABL-
negative. In contrast, the nested PCR was BCR-ABL-negative in 12 of 21 assays
(57%). BCR-ABL-negative CD34+ cells could be generated in seven patients. A
Wilcoxon signed-rank test indicating that differences in the mean peripheral
blood and bone marrow BCR-ABL load prior to SCM compared to the mean value 1-2
months after SCM were not significant. The results of qualitative PCR prior to
SCM and 1-2 months after SCM were unchanged. An increase of BCR-ABL
transcripts after SCM was detected in two patients, while a decrease was
detected in another two patients by negative nested PCR. This dissertation
demonstrated the safety and efficacy of autologous stem cell apheresis under
imatinib therapy in CML patients in CCR. Successful apheresis could be
generated in 12 patients. Even seven BCR-ABL-negative stem cell products could
be obtained suggesting that in vivo purging was successful. The incidence of
relapse caused by resistance requires further studies to optimise the therapy
of CML. Autologous stem cell apheresis and transplantation could be an
alternative temporary therapeutic option at relapse.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Apherese von CD34-positiven Vorläuferzellen unter Imatinibmesylat bei
Patienten mit chronischer myeloischer Leukämie in kompletter zytogenetischer
Remission
dc.contributor.contact
Christine.Kluehs@charite.de
dc.contributor.firstReferee
Priv.-Doz. Dr. med. Ph. le Coutre
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. med. M. Bornhäuser
dc.contributor.furtherReferee
Priv.-Doz. Dr. med. Th. Held
dc.date.accepted
2008-11-07
dc.date.embargoEnd
2008-11-22
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000005768-4
dc.title.subtitle
Ein Modell für erfolgreiches In-vivo-Purging
dc.title.translated
CD34+ leucapheresis in chronic myeloid leukemia patients achieving complete
cytogenetic response during imatinib therapy
en
dc.title.translatedsubtitle
a model of efficient in vivo purging
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000005768
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FUDISS_derivate_000000011302
dcterms.accessRights.dnb
free
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open access