Tenascin-C und Neurotensin-Rezeptor-1 als Markermoleküle des Ösophaguskarzinoms

Abstract

Die vorliegende Arbeit untersucht das Vorkommen des Neurotensin-Rezeptors-1 und von Tenascin-C im Plattenepithel- und Adenokarzinom des Ösophagus. Für den Neurotensinrezeptor 1 gab es bisher zwar bei anderen Tumorentitäten Nachweise, jedoch noch keine Hinweise auf eine vermehrte Expression im Ösophaguskarzinom. Tenascin-C war bereits in geringeren Fallzahlen ohne Differenzierung der Spleißvariante im Ösophaguskarzinom untersucht worden. Material und Methoden: Es wurden gefrorene Präparate von insgesamt 54 Patienten, die an der Charité operiert worden waren, sowie 60 kommerziell erworbene paraffinierte Proben untersucht. Methodisch stand die Immunhistochemie im Vordergrund. Immunfluoreszenz an Zellkulturen, Transfektion, Western-Blot und Autoradiographie dienten zur Überprüfung der Methode und der gewonnenen Ergebnisse. Alle Ergebnisse wurden von zwei unabhängigen Untersuchern begutachtet. Ergebnisse Für den NTR-1 wurde hier erstmalig ein Vorkommen im Ösophaguskarzinomgewebe bei 10 von 54 untersuchten Proben nachgewiesen. Die lange Spleißvariante von Tenascin-C fand sich im Bindegewebe von allen untersuchten 114 Proben von Ösophaguskarzinomen. Hier zeigten sich auch signifikante Unterschiede in der Färbungsintensität zwischen gefrorenen und paraffinierten Geweben Zwar fanden sich auch geringe Vorkommen in den untersuchten 30/36 tumorfreien Kontrollgeweben, jedoch nur in signifikant geringerer Ausprägung. Diskussion Die Antikörperbindung an G-Protein- gekoppelte Rezeptoren ist insgesamt schwierig. Dennoch fanden sich mit Immunfluoreszenzuntersuchungen an transfizierten Zellkulturen Hinweise darauf, daß die Bindung des verwendeten Antikörpers spezifisch an den NTR-1 erfolgte. Weitere Versuche sollten jedoch folgen. Die lange Spleißvariante des Tenascin-C ist nach den vorliegenden Daten ein gutes histologisches Markermolekül bei Adeno- und Plattenepithelkarzinomen des Ösophagus, welches mit einer gute Sensitivität und Spezifität zwischen malignem und nicht tumorbefallenem Gewebe differenzieren kann. Eine klinische Anwendung existiert bei gastrointestinalen Karzinomen noch nicht. Diese existiert bei anderen Tumorentitäten. Diese Arbeit gibt weitere Hinweise darauf, daß Tenascin-C auch beim Ösophaguskarzinom ein vielversprechendes Ziel für klinische Anwendungen sein könnte.

This study examines the prevalence of Neurotensin Receptor 1 and Tenascin-C in Esophageal Squamous cell and Adenocarcinoma. Neurotensin Receptor 1 (NTR-1) is overexpressed in many tumours of the gastrointestinal tract, but until now its overexpression in esophageal cancer had not been investigated. Tenascin-C (TnC) is a hexamer glycoprotein of the extracellular matrix. Especially the long unspliced isoform of TnC is known to be overexpressed in malignomas. While there are two small studies showing Tenascin-C to be overexpressed in esophageal squamous cell and adenocarcinoma until this point there has been no bigger systematic study of Tenascin-C in oesophageal cancer. Furthermore no existing study focuses on the long unspliced isoform of Tenascin-C. Material and Methods 54 samples were obtained from patients with oesophageal adenocarcinoma (AC) or squamous cell carcinoma (SCC) operated at Charité Campus Virchow Klinikum. Oesophageal tissue without tumour infiltration existed for 36 of these patients and was used as control sample. In addition we used a commercial tissue array with 60 samples of AC and SCC coated with paraffin wax. In total we had 68 SCC samples,,40 AC samples and six rare tumour entities. To detect NTR-1 and TnC mainly immunohistochemical methods were applied. Immunofluorescence in cell cultures, transfection, Western-Blot and Autoradiography were used to proof the methods and the results obtained. Results The presence of NTR-1 in esophageal carcinoma is first described here in 10 of 54 tissue samples. The long splicing variant of TnC was detected in the connective tissue of all 114 tissue samples of esophageal cancer. There were significant differences in the intensity of staining between frozen and paraffine-coated tissue samples. The presence of TnC in control tissues was significantly lower. Discussion G-Protein-coupled receptors like NTR-1 are known to be a difficult target in immunohistochemistry. Nevertheless the positive staining of transfected cells found within this study gives some evidence as to the specifity of this staining. The long splicing form of TnC is a good histologic marker of oesophageal cancer, which can distinguish between malignant and non-malignant tissue with good sensitivity and specifity. Up to now there is no clinical application of TnC-Antibodies in gastrointestinal tumours. This study shows that TnC is a promising target for clinical applications.