dc.contributor.author
Lenze, Dido
dc.date.accessioned
2018-06-07T15:57:20Z
dc.date.available
2004-03-23T00:00:00.649Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/1837
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-6039
dc.description
Titelblatt und Inhalt
1\. Einleitung 1
2\. Material und Methoden 9
3\. Ergebnisse 46
4\. Diskussion 92
5\. Zusammenfassung 104
6\. Abkuerzungsverzeichnis 107
7\. Literaturverzeichnis 109
8\. Danksagung 115
9\. Lebenslauf 117
dc.description.abstract
Als MALT (Mucosa associated lymphoid tissue) bezeichnet man das lymphatische
Gewebe, das in Schleimhäuten vorkommt und den Körper gegen pathogene Einflüsse
von außen schützt. Es ist nur in wenigen Organen konstitutiv vorhanden und
entsteht in der Regel erst als Reaktion auf Infektionen oder Entzündungen. Im
Falle lang anhaltender (chronischer) Entzündungsreaktionen besteht die Gefahr,
dass lymphatische Zellen genetische Defekte erwerben bzw. akkumulieren, aus
denen sich Tumore (Lymphome) entwickeln können. Ein Beispiel für die
Tumorenstehung aus einer chronischen Entzündung sind die Magen MALT-Lymphome,
die sich in den meisten Fällen im Rahmen einer durch das Bakterium
Helicobacter pylori hervorgerufenen Gastritis entwickeln. Bei den Tumorzellen
der MALT-Lymphome handelt es sich um B-Zellen, die Immunglobuline an ihrer
Zelloberfläche exprimieren. Die Struktur dieser Immunglobuline zeigt Merkmale,
wie sie für Antigen-induzierte Gedächtnis-B-Zellen typisch sind. Aufgrund der
Beobachtung, dass die Eradikation von H. pylori (Antibiotikabehandlung) zur
kompletten Regression des MALT-Lymphoms führt, wurde das Konzept entwickelt,
dass die Lymphomentstehung auf dem Boden einer Antigen induzierten Entzündung
erfolgt und dass die Tumorzellen, zumindest in der initialen Phase,
Antigenkontakt für ihre Proliferation benötigen. Die Identifizierung der
Antigene, die für diese Stimulation des Wachstums der Tumorzellen
verantwortlich sind, war das Ziel dieser Doktorarbeit. Dazu wurden sieben
MALT-Lymphome verschiedener Lokalisationen (4x Magen, je 1x Lunge,
Speicheldrüse und Schilddrüse) ausgewählt. Die klonalen Immunglobulingen-
umlagerungen der Tumorzellen wurden amplifiziert, kloniert und als scFv-
Antikörper exprimiert. Die Untersuchung der Antigenspezifität der sieben scFvs
erfolgte durch die immunhistologische Färbung einer großen Palette von
Normalgeweben und MALT-Lymphomen sowie H. pylori positiven Magenbiopsaten. Die
Reaktivität der scFv-Antikörper gegenüber H. pylori Proteinen wurde an nativen
und denaturierten Zelllysaten im Western Blot überprüft. Parallel dazu wurden
eine ca. 30.000 Proteine umfassende Expressionsbank aus humanem fötalem Gehirn
(Proteinfilter) und eine Peptidbibliothek mit 5520 Peptiden, die jeweils
mehrere überlappende Epitope darstellen (Peptidarray) mit den scFvs
untersucht. Der 1427-scFv erkannte in immunhistologisch gefärbten
Gewebeschnitten von Tonsillen ein Immunglobulinsubklassen unabhängiges
Plasmazellantigen. Auf dem Proteinfilter erkannte er das Protein CGI-126/HSPC
155, dessen physiologische Funktion nicht bekannt ist. Die zugehörige mRNA
wird, laut Datenbank, in einem breiten Spektrum von normalen und malignen
Geweben exprimiert. Darüber hinaus konnte eine deutlich höhere Expression in
Plasmazelllinien beobachtet werden. Für den 4476-scFv konnten auf dem
Peptidarray neun Peptide als Bindungspartner ermittelt werden. Eine Homologie
der Sequenzen zu vorhandenen Datenbankeinträgen lag nicht vor. Die für die
scFvs 1427 und 4476 gefundenen Bindungspartner ließen keinen Rückschluss auf
ihre Bedeutung für die MALT-Lymphom Entstehung zu. Für die anderen fünf scFvs
konnte mit den gewählten Methoden keine Bindung an Proteine gezeigt werden.
Dies kann bedeuten, dass der Ausgangspunkt der Tumorzellentwicklung eine
unspezifische B-Zell-Aktivierung ist, die keinen gerichteten somatischen
Mutationsprozess auslöst und durch die daher keine, ein bestimmtes Antigen
erkennende Immunglobuline entstehen.
de
dc.description.abstract
Mucosa associated lymphoid tissue (MALT) describes secondary lymphoid tissues
located at mucosal sites which function as a protection against external
pathogens. MALT is constitutively present in only few organs, but it rather
develops as a consequence of infection or inflammation. In the case of ongoing
(chronic) inflammation, lymphatic cells are at risk to acquire and/or
accumulate genetic defects, that might lead to the development of tumors. An
example for tumor (lymphoma) development on the basis of chronic inflammation
are gastric MALT-lymphomas, which frequently develop in the context of a
Helicobacter pylori induced gastritis. The tumor cells of MALT-lymphomas have
been identified as B-cells that express immunoglobulin molecules on their cell
surface. The structure of their immunoglobulin genes resembles that of
antigen-activated memory B-cells. Based on the observation that eradication of
Helicobacter pylori by antibiotic treatment leads to a complete remission of
most gastric MALT-lymphomas, the concept evolved that the tumor development is
associated with an antigen-induced inflammation and that the tumor cells
require, at least in an initial phase, the contact with an antigen for their
proliferation. The identification of the antigens responsible for the growth
of the tumor cells, was the aim of this thesis. For this purpose seven MALT-
lymphomas of different locations (4x stomach; 1x lung, salivary gland and
thyroid gland, respectively) were selected. The clonal immunoglobulin
rearrangements of the tumor cells were amplified, cloned and expressed as
single chain fragment variety (scFv)-antibodies. The antigen specificity of
the seven scFvs was analyzed by immunohistochemical staining of a wide variety
of normal human tissues and the MALT-lymphomas, where they derive from, as
well as H. pylori positive gastric biopsies. The reactivity of the scFvs
against H. pylori proteins was further examined in Western Blots of native and
denatured cell lysates. In parallel an expression library comprising
approximately 30.000 proteins from human fetal brain (protein filter) and a
peptide library with 5520 peptides (petide array), each representing several
overlapping epitopes were screened. The 1427-scFv recognized an immunglobulin
subtype independent plasma cell antigen in sections of immunohistochemically
stained tonsils. On the protein filter it recognized the protein CGI-126/HSPC
155, a molecule of unknown physiological function. The corresponding mRNA is,
according to databases searched, expressed in a wide variety of normal and
malignant tissues. In addition a significant elevated expression level was
found in plasma cells. For the 4476-scFv, nine peptides could be identified as
binding partners on the peptide array, however without homology to any
sequence in public databases. The binding partners identified for the scFvs
1427 and 4476 allowed no conclusions about their role in MALT-lymphoma
development. For the other five scFvs no binding to any structure could be
identified with any of the methods chosen. Thus, in contrast to pulished
studies, in this thesis the majority of immunoglobulins derived from the tumor
cells of MALT-lymphomas showed no reactivity against (auto-) antigens.
Therefore the starting point of the tumor cell development appears to be an
unspecific activation, that does not elicit an antigen-directed mutational
process and thus fail to produce an immunoglobulin that recognizes a specific
antigen.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
receptor revision
dc.subject.ddc
500 Naturwissenschaften und Mathematik::570 Biowissenschaften; Biologie::570 Biowissenschaften; Biologie
dc.title
Untersuchung des Einflusses von Antigenen auf die Entstehung von MALT-
Lymphomen
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. Harald Stein
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. Volker Erdmann
dc.date.accepted
2004-02-23
dc.date.embargoEnd
2004-04-06
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-2004000831
dc.title.translated
Analysis of the Influence of Antigen on the Development of MALT-Lymphoma
en
refubium.affiliation
Biologie, Chemie, Pharmazie
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000001474
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http://www.diss.fu-berlin.de/2004/83/
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FUDISS_derivate_000000001474
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open access