dc.contributor.author
Taube, Stefan
dc.date.accessioned
2018-06-08T01:46:12Z
dc.date.available
2006-02-09T00:00:00.649Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/13852
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-18050
dc.description
Titelblatt und Inhaltsverzeichnis
Einleitung
Materialien und Methoden
Ergebnisse
Diskussion
Literaturverzeichnis
Anhang
dc.description.abstract
Zur Therapie der chronischen Hepatitis C wird derzeit pegyliertes Interferon
(IFN)-a in Kombination mit dem Nukleosidanalog «Ribavirin» eingesetzt. Der
Erfolg der Kombinationstherapie ist stark genotypabhängig. Derzeit sind etwa
40 % der Genotyp 1 und 70-80 % der Genotyp 2/3 Patienten in der Lage, das
Virus nachhaltig zu eliminieren. In der vorliegenden Arbeit wurde der
Mechanismus der Resistenz von HCV gegenüber der antiviralen IFN-Therapie
untersucht. Als Grundlage zur molekularen Charakterisierung dienten Seren von
9 Patienten mit den HCV-Genotypen 1a/b und 3, die im Rahmen von klinischen
Studien charakterisiert wurden. Der Fokus dieser Arbeit wurde auf das
Nichtstrukturprotein 5A (NS5A) gelegt. Mit Hilfe von funktionalen
Reporterassays wurde der Einfluss von insgesamt 14 verschiedenen NS5A-
Proteinen untersucht. Hierbei wurden Isolate der HCV-Genotypen 1a, 1b und 3a
von Patienten mit unterschiedlichem Therapieansprechen (non-response (NR),
sustained virologic response (SVR) und breakthrough (BT)) analysiert. Es
konnte gezeigt werden, dass NS5A IFN-Signaling funktional durch Inhibition des
Transkriptionsfaktors p48 (IRF-9) inhibieren kann. Alle 14 NS5A-Proteine waren
in der Lage IFN-stimulated response element (ISRE)-vermittelte Genexpression
zu inhibieren. Dieser Effekt ist somit unabhängig vom Therapieansprechen des
Patienten und vom viralen Genotyp. Co-Expression von p48 führte zu einer
Wiederherstellung des IFN-Signalings in NS5A-transfizierten Zellen, nicht aber
in Zellen, die mit dem IFN-Antagonisten M27 transfiziert wurden.
Mutagenesestudien zeigten, dass die funktionale Domäne für diese Inhibition
auf den N-terminalen 238 Aminosäuren von NS5A liegt und weder die putative
ISDR, PKR oder V3-Region hierbei involviert sind. Die N-terminalen
Deletionsmutanten NS5A-239-451 und 279-451 zeigten keinen Einfluss auf
Typ-1-IFN vermitteltes Signaling. Ein Effekt auf IFN-Induktion wurde ebenfalls
beobachtet, verhielt sich aber im Vergleich zu bekannten Antagonisten dieser
Signalkaskade, wie z.B. dem Influenza A Protein «NS1» und dem Ebola Protein
«VP35» sehr viel schlechter. Eine biologische Relevanz konnte mit Hilfe der
IFN-sensitiven Rekombinante des Influenza A-Virus «delNS1» gezeigt werden.
NS5A war hierbei in der Lage, Viruswachstum in IFN-kompetenten MDCK2-Zellen
wiederherzustellen. Somit kann NS5A den IFN-Antagonisten NS1 funktional
komplementieren. Insgesamt unterstützt diese Arbeit die Beobachtung, dass NS5A
in der Lage ist, IFN-Signaling zu inhibieren. Es wurde erstmalig gezeigt, dass
NS5A p48 (IRF 9) inhibieren kann und somit ISRE-abhängige Genexpression
blockiert wird.
de
dc.description.abstract
Chronic hepatitis C is currently treated with pegylated interferon (IFN)-a in
combination with the nucleoside analog «ribavirin». Success of the combination
therapy strongly depends on the viral genotype. Today approximately 40 percent
of the genotype 1 and 80 % of the genotype 3 patients show a sustained virus
clearance. The mechanism of resistance of HCV against antiviral IFN-therapy is
subject of this study. The basis of the molecular characterisation constitute
sera of nine patients with genotypes 1a/b and 3a that have been characterised
in clinical trials. Based on recent literature the emphasis of this work was
put on the nonstructural protein 5A (NS5A). Using functional reporter-assays
the influence of 14 different NS5A-proteins was analysed. Isolates of the
genotypes 1a/b and 3a from patients with different therapy-responses (non-
response (NR), sustained virologic response (SVR) und breakthrough (BT) were
characterised. It was shown that NS5A functionally blocks IFN-signaling by
inhibiting the transcription factor p48 (IRF-9). All 14 NS5A-proteins analysed
were functionally capable of inhibiting IFN-stimulated response element
(ISRE)-induced gene expression. Consequently this effect is independent of the
therapy-response of the patient and independent of the viral genotype. Co-
expression of p48 lead to a rescue of IFN-signaling in NS5A-transfected cells
but not in cells transfected with the IFN-antagonist M27. Mutagenesis studies
have shown that the functional domain for this inhibition resides on the
n-terminal 238 amino acids of NS5A and neither the ISDR, the PKR nor the V3
region are involved in this process. The n-terminally deleted mutants
NS5A-239-450 and NS5A-279-451 show no influence on type-1-IFN induced
signaling. An effect on IFN-induction was also observed, although it did not
compare to the known inhibitors of this pathway, such as the Influenza A
protein «NS1» and the Ebola protein «VP35». A biological relevance was shown
using the recombinant Influenza A virus «delNS1», which is IFN-sensitive. NS5A
was capable of rescuing viral growth in IFN-competent MDCK2-cells. Hence NS5A
was capable of complementing the IFN-antagonist NS1. This work adds to the
observations that NS5A functionally inhibits IFN-signaling. It shows for the
first time that NS5A can inhibit p48 (IRF 9) and blocks ISRE-dependent gene
expression.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
Hepatitis NS5A Interferon
dc.subject.ddc
500 Naturwissenschaften und Mathematik::570 Biowissenschaften; Biologie::570 Biowissenschaften; Biologie
dc.title
Charakterisierung des Hepatitis C Virus NS5A-Proteins als funktionalen
Inhibitor der Interferon induzierten antiviralen Immunantwort
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. Eckart Schreier
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. Rupert Mutzel
dc.date.accepted
2006-02-03
dc.date.embargoEnd
2006-02-10
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-2006000755
dc.title.translated
Characterisation of the Hepatitis C Virus NS5A Protein as a Functional
Inhibitor of the Interferon Induced Antiviral Immune Response
en
refubium.affiliation
Biologie, Chemie, Pharmazie
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000001943
refubium.mycore.transfer
http://www.diss.fu-berlin.de/2006/75/
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000001943
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access