dc.contributor.author
Engel, Eileen Corinna
dc.date.accessioned
2018-06-08T01:45:37Z
dc.date.available
2010-11-15T10:37:47.879Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/13825
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-18023
dc.description.abstract
Bisher existieren keine Arbeiten zur mRNA-Expression in zellfreier
Bronchiallavage (BL). Die vorliegende Dissertation umfasst qualitative und
quantitative Untersuchungen der mRNA-Expression in zellfreier BL, zellfreiem
Serum und BL-Zellen. Die Untersuchungen ergaben folgende Ergebnisse: 1\.
Extrazelluläre mRNA lässt sich in zellfreier BL detektieren. Es konnte mit
verschiedenen Isolationsmethoden intakte, amplifizierbare mRNA aus zellfreier
BL isoliert werden. 2\. Die Qualität und Quantität der mRNA aus BL, Serum und
BL-Zellen sind ausreichend für weitere Untersuchungen. Neben ß-Aktin als
Amplifikationskontrolle wurde mittels qualitativer PCR eine mRNA-Expression
von HER2/neu, hnRNP-B1, MAGE-2, PGP 9.5, TTF-1, Telomerase (hTR und hTERT),
Pericentrin und Aurora 2 in BL, Serum und BL-Zellen von Tumor- und
Nichttumorpatienten detektiert. Die Expression einiger Gene wurde vermehrt in
jeweils einem der untersuchten Materialien nachgewiesen. Beispielsweise wurde
PGP 9.5 nur in der BL und BL-Zellen, aber nicht im Serum detektiert.
Zusätzlich zu den erwarteten Produkten traten bei den Genen hnRNP-B1 und
MAGE-2 Splicevarianten auf. Eine Unterscheidung der Tumor- von den
Nichttumorpatienten war mit qualitativen Expressionsanalysen nicht möglich.
3\. Mit quantitativen Analysen von mRNA aus BL ist eine Unterscheidung
zwischen Tumor- und Nichttumorpatienten möglich. Die absolute Quantifizierung
der GAPDH-spezifischen mRNA mittels Real-Time PCR zeigte signifikant höhere
GAPDH-Konzentrationen in der BL von Tumorpatienten als in der BL von
Nichttumorpatienten. Die relative Quantifizierung der Gene hnRNP-B1 und MAGE-2
mit GAPDH als Referenzgen erbrachte signifikant höhere hnRNP-B1- bzw.
MAGE-2-Kopienzahlen in zellfreier BL von Tumorpatienten im Vergleich zu
Nichttumorpatienten. Die Ergebnisse der relativen Quantifizierung sind
aufgrund der umstrittenen Eignung von GAPDH als Referenzgen und der geringen
Patientenzahl kritisch zu betrachten. Die quantitativen Analysen der mRNA aus
Serum und BL-Zellen zeigten keine signifikanten Unterschiede zwischen Tumor-
und Nichttumorpatienten. 4\. Die Untersuchungen dieser Arbeit zeigen, dass
zellfreie BL ebenso wie andere zellfreie Materialien, z. B. Serum, für mRNA-
Expressionsanalysen geeignet ist.
de
dc.description.abstract
Up to now, no works on mRNA expression in cell-free bronchial lavage (BL)
exist. This thesis covers qualitative and quantitative analysis of mRNA
expression in cell-free BL, cell-free serum and BL cells. The following
results were obtained in this study: 1\. Extracellular mRNA can be detected in
cell-free BL. Intact and amplifiable mRNA from cell-free BL could be isolated
using different isolation methods. 2\. The quality and quantity of mRNA from
BL, serum and BL cells are sufficient for further investigation. In addition
to ß-actin as an amplification control, an mRNA-expression of HER2/neu,
hnRNP-B1, MAGE-2, PGP 9.5, TTF-1, telomerase (hTR and hTERT), pericentrin, and
Aurora 2 is detected in BL, serum, and BL cells of tumor and non-tumor
patients using qualitative PCR. The expression of some genes was found in each
one of the study materials. For example, PGP 9.5 was detected only in the BL
and BL cells, but not in the serum. In addition to the expected products,
splice variants occurred in genes of hnRNP-B1 and MAGE-2. A differentiation of
tumor from non-tumor patients with qualitative expression analysis was not
possible. 3\. It is not possible to distinguish between tumor and non-tumor
patients with quantitative analysis of mRNA from BL. The absolute
quantification of GAPDH specific mRNA by means of real-time PCR showed
significantly higher GAPDH concentrations in the BL of tumor patients than in
the BL of non-tumor patients. The relative quantification of the genes
hnRNP-B1 and MAGE-2 with GAPDH as reference yielded significantly higher
numbers of hnRNP-B1 and MAGE-2 in cell-free BL of tumor patients compared to
BL of non-tumor patients. The results of the relative quantification may be
considered critical because of the controversial suitability of GAPDH as
reference gene and the small number of patients. The quantitative analysis of
mRNA from serum and BL-cells doesn’t show significant differences between
tumor and non-tumor patients. 4\. The examinations of this study show that
cell-free BL just as other cell-free materials, e.g., serum, is suitable for
mRNA-expression analysis.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
cell-free nucleic acids
dc.subject
extracellular mRNA
dc.subject
bronchial lavage
dc.subject
real-time quantitative RT-PCR
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Nachweis von tumorassoziierter mRNA in Serum und zellfreier Bronchiallavage
von Patienten mit benigner und maligner Lungenerkrankung
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. med. Ch. Witt
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. med. A. Gillissen, Prof. Dr. med. R. Schindler
dc.date.accepted
2010-11-19
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000019067-4
dc.title.translated
Detection of tumorassociated messenger RNA in serum and cell-free bronchial
lavage samples of patients with benign and malign lung diseases
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000019067
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000008242
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access