dc.contributor.author
Kellner, Tobias
dc.date.accessioned
2018-06-07T15:37:28Z
dc.date.available
2007-07-28T00:00:00.649Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/1350
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-5552
dc.description
Titelblatt, Inhaltsverzeichnis, Danksagung und Lebenslauf
1\. Einleitung
2\. Materialien und Methoden
3\. Ergebnisse
4\. Diskussion
5\. Zusammenfassung
6\. Literaturverzeichnis
dc.description.abstract
Ziel der vorliegenden Arbeit war die Klärung der Frage, ob H-REV107-2 und
MUC18 im Ovarialepithel als Tumor-Suppressor-Gene in Betracht kommen. Die
Expression beider Gene wurde in sieben Ovarialkarzinom-Zelllinien, einer
Ovarialepithel-Zelllinie und mehreren Ovarialkarzinomen auf mRNA-Ebene
untersucht. Zusätzlich wurde der Einfluss einer Überexpression beider Gene auf
das Wachstum in den Zelllinien A27/80 und OVCAR-3 untersucht. H-REV107-2 ist
ein durch Retinsäure induzierbares Gen, welches in der Literatur bereits
mehrfach als Klasse II Tumor-Suppressor-Gen beschrieben wurde. Über seine
Expression im Ovarialkarzinom war bis zum jetzigen Zeitpunkt noch nichts
bekannt. Die Analyse der H-REV107-2 Expression zeigte, dass H-REV107-2 im
normalen Ovarialepithel in vitro exprimiert wird. In vier der sieben
Ovarialkarzinom-Zelllinien konnte keine und in neun der 21 untersuchten
Ovarialkarzinome eine stark verminderte H-REV107-2 Expression nachgewiesen
werden. Die Blockade der RAF/MEK/ERK-Signalkaskade führte in drei Zelllinien
zu einer Reexpression von H-REV107-2. Eine reversible Suppression ist ein
typisches Merkmal eines Klasse II Tumor-Suppresspor-Gens. Eine Überexpression
des Gens in der Ovarialkarzinom-Zelllinie A27/80 führte zu einer signifikanten
Verminderung des Koloniewachstums um mehr als 60%. In der Zelllinie OVCAR-3
hatte H-REV107-2 keinen Einfluss auf das Koloniewachstum. H-REV107-2 ist nicht
wie ursprünglich angenommen auf Chromosom 11q23 lokalisiert, sondern auf
11q12, so wie das verwandte Gen H-REV107-1. Beide Gene agieren als negative
Wachstumsregulatoren, beide sind teilweise über einen aktiven RAF/MEK/ERK-
Signalweg supprimiert, und beide führen nach Überexpression zur Hemmung des
Wachstums und zum programmierten Zelltod. MUC18 wurde ursprünglich als Gen
identifiziert, welches mit der Invasion und Metastasierung von malignen
Melanomen assoziiert ist. Im Mammakarzinom wurde MUC18 jedoch als Tumor-
Suppressor beschrieben. Über seine Expression im Ovarialkarzinom war bis zum
jetzigen Zeitpunkt sehr wenig bekannt. Die Expressionsanalyse zeigte, dass
MUC18 im normalen Ovarialepithel in vitro exprimiert wird. In vier von sieben
Ovarialkarzinom-Zelllinien konnte keine und in zwei der drei untersuchten
Ovarialkarzinome eine verminderte MUC18 Expression nachgewiesen werden. Eine
reversible Suppression des Gens im Ovarialkarzinom konnte durch die
Experimente nicht gezeigt werden. Aber die Überexpression von MUC18 in der
Ovarialkarzinom-Zelllinie A27/80 führte zu einer signifikanten Hemmung des
Koloniewachstums um 44,5%. Diese Ergebnisse legen die Vermutung nahe, dass
MUC18 im Ovarialkarzinom nicht als Klasse II Tumor-Suppressor-Gen, sondern als
Klasse I Tumor-Suppressor-Gen fungiert. Dafür spricht auch die chromosomale
Lokalisation auf 11q23.3, einer Region, die in humanen Tumoren häufig verloren
geht. Aus publizierten CGH-Analysen der Zelllinien OVCAR-3 und CAOV-3 war ein
DNA-Verlust auf 11q21-qter bzw. 11q23-qter bekannt. In beiden Zelllinien
konnte aber eine MUC18 Expression nachgewiesen werden. Weiterhin offen bleibt
die Frage, warum MUC18 in verschiedenen Tumorzelltypen eine unterschiedliche
Wirkung entfaltet. Hierfür sind weitere funktionelle Analysen der durch MUC18
determinierten Regulation des Zytoskelettes notwendig.
de
dc.description.abstract
In our study we investigated the expression of the potential tumor suppressor
genes H-REV 107-2/TIG3 und MUC18/MelCAM in human ovarian carcinoma cell lines
an ovarian carcinomas. Therefore we performed a nothern blot analysis of 7
ovarian carcinoma cell lines and one ovarian epithelium cell line HOSE.
Expression of TIG3 and MUC18 mRNA was detectedin the HOSE cell line. 4 of the
7 ovarian carcinoma cell lines showed no expression of TIG3 or MUC18 mRNA. We
treated the ovarian carcinoma cell lines with an inhibitor against activated
MEK (PD98059) and investigated TIG3 and MUC18 expression. The same cells were
also treated with an inhibitor of PI-3 kinase (LY294002). Increased levels of
TIG3 mRNA were observed 48 hr after addition of the MEK-inhibitor PD98059 in
CAOV-3, ES-2 and SKOV-3 cells. Modulation of the same pathway did not
influence TIG3 expression in MDAH2774, PA-1, OVCAR-3 and A27/80 cells and had
also no effect onto MUC18 expression in all 7 carcinoma cell lines. Abrogation
of PI-3 kinase signaling by the specific inhibitor LY294002 had no effect onto
TIG3 and MUC18 expression. In addition we analyzed a Cancer Profiling Array, a
Matched Tumor/Normal Array and an Ovarian Tumor Blot representing cDNA and RNA
pairs derived from human tumor tissues and their corresponding normal
counterparts of individual patients. In this analysis we detected loss of TIG3
and MUC18 expression in a significant proportion of ovarian carcinomas. We
also performed a colony formation assay with A27/80 cells. Ectopic expression
of TIG3 in A27/80 cells inhibited the colony formation by more than 60% in
comparison to cells transfected with pcDNA3. Ectopic expression of MUC18 in
A27/80 cells inhibited the colony formation by more than 40% in comparison to
cells transfected with pcDNA3. In conclusion TIG3 is a class II tumor
suppressor gene in ovarian carcinomas, whereas MUC18 seems to be a class I
tumor suppressor in ovarian carcinomas.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
ovarian carcinoma
dc.subject
class II tumor suppressor genes
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Expressionsanalyse der potenziellen Tumor-Suppressor-Gene H-REV107-2 / TIG 3 &
MUC18 / Mel-CAM in humanen Ovarialkarzinom-Zelllinien und Ovarialkarzinomen
dc.contributor.firstReferee
Priv.-Doz. Dr. rer. nat. Chr. Sers
dc.contributor.furtherReferee
Priv.-Doz. Dr. Chr. Falk
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. med. R. Knüchel-Clarke
dc.date.accepted
2007-07-09
dc.date.embargoEnd
2007-01-12
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000003137-9
dc.title.translated
Expression analysis of the two potential tumor suppressor genes H-REV
107-2/TIG3 und MUC18/MelCAM in human ovarian carcinoma cell lines an ovarian
carcinomas
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
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FUDISS_thesis_000000003137
refubium.mycore.transfer
http://www.diss.fu-berlin.de/2007/522/
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open access