Evaluation eines Norovirus-spezifischen Bedside-Tests bei Patienten mit Gastroenteritis

Abstract

Noroviren gehören weltweit zu den häufigsten Erregern akuter nicht- bakterieller Gastroenteritis. Infektionen sind charakterisiert durch rasche, ausbruchartige Ausbreitung, insbesondere in Gemeinschaftseinrichtungen, und verlaufen meist selbstlimitierend, jedoch sind protrahierte und komplikationsreiche Verläufe für vulnerable Patientengruppen beschrieben. Bei rein symptomatischen Therapieoptionen liegt das primäre Ziel im frühzeitigen Erkennen und Einleiten von Infektionsschutzmaßnahmen. Die Diagnosestellung kann durch klinische Kriterien erfolgen, deren Sensitivität und Spezifität sind jedoch begrenzt. Als diagnostischer „Goldstandard“ gilt derzeit die real- time PCR. Dieses Verfahren ist hochsensitiv, die Testergebnisse sind jedoch nicht unmittelbar verfügbar. Enzymimmunoassays sind weniger sensitiv, jedoch hochspezifisch, kostengünstig, einfacher und schneller durchführbar. Der Norovirus-spezifische Enzymimmunoassay RIDA®QUICK NV wurde in dieser Studie erstmals als Bedside-Test unter realistischen Bedingungen im Klinikalltag evaluiert und zeigte sich mit bisherigen Evaluierungsstudien, welche durchweg unter standardisierten Laborbedingungen erfolgten, vergleichbar. Bei 65 Studienpatienten mit Gastroenteritis betrug die Sensitivität 53 % bei einer hohen Spezifität von 97 %. Die Durchführung erforderte Aufmerksamkeit, ermöglichte aber innerhalb von 20 Minuten patientennah ein Testergebnis. Variierende, begrenzt standardisierten Testbedingungen (z.B. Probenhomogenisierung) sowie Testung frischer, zwischenzeitlich nicht gefrorener Proben scheinen sich negativ auf die Testsensitivität auszuwirken. Die Sensitivität der RIDA®QUICK NV Nachtestung aller Proben unter standardisierten Bedingungen war höher als in der Bedside-Testung (56 % versus 44 %). Ein positiver Bedside-Test war mit höheren Viruslasten (niedriger Ct- Wert PCR, hohe Extinktion ELISA) assoziiert (p≤0,0057). Ein Zusammenhang zwischen dem Schweregrad der Erkrankung (hoher Severity Score) oder der Anzahl der Tage zwischen Symptombeginn und Bedside-Testung wurde nicht festgestellt. Die serielle Nachtestung initial falsch-negativer Bedside-Testungen (n=4) war bei ambulant behandelten Patienten und Verlegungen nicht konsequent umsetzbar und zeigte lediglich bei einem Patienten im Verlauf eine Konversion in einen richtig-positiven Befund. Der RIDA®QUICK NV wurde für Stuhlproben entwickelt. In dieser Arbeit wurden erstmals auch Proben aus Erbrochenem (n=3) und Ileostomata (n=2) mit einem positiven Befund im Erbrochenen getestet. Zusammenfassend handelt es sich beim RIDA®QUICK NV um ein kostengünstiges, im Klinikalltag und Bereichen, in denen Labormethoden nicht unmittelbar zur Verfügung stehen, praktikables Instrument zum Norovirusnachweis. Die Testung mehrerer erkrankter Personen ermöglicht bei hoher Testspezifität eine zuverlässige Identifizierung von Ausbrüchen, wobei die Untersuchung von 8 – 17 Proben mittels RIDA®QUICK NV Bedside-Testung (kumulative Wahrscheinlichkeit >90 %) genügt. Bei Testung von 4 Proben eines Ausbruchs ist ein positiver Befund zur korrekten Identifikation von Norovirus als Infektionserreger ausreichend. In Zweifelsfällen und Gefährdung von Risikopatienten sollten jedoch, insbesondere negative Testbefunde, mittels PCR verifiziert werden. Eine Optimierung der Sensitivität und weitere Vereinfachung der Handhabung des RIDA®QUICK NV ist für künftige Testvarianten wünschenswert.

Noroviruses belong to the most common causes of acute non-bacterial gastroenteritis. Norovirus infections are characterized by outbreaks with rapid spreading. The disease is usually self-limited, but prolonged symptoms in vulnerable patients have been described. Treatment consists in supportive care, so early recognition with infection control measures is important. Norovirus infections may be diagnosed by clinical criteria, but these exhibit limited sensitivity and specificity. In contrast, Norovirus-specific PCR displays a high sensitivity and is accepted as diagnostic standard, but the results are not always readily available. Immunoassays are less sensitive but highly specific, faster and more cost-efficient. Compared to previous studies using stored samples and standardised laboratory conditions, the Norovirus- specific immunoassay RIDA®QUICK NV was evaluated in this trial for the first time in daily clinical routine. In 65 unselected patients with gastroenteritis, this test showed limited sensitivity of 53 % and a specificity of 97 %. Test performance required attention but results were available within 20 minutes. Varying test conditions (eg, specimen homogenization) and use of fresh samples appeared to impact test sensitivity. The sensitivity was higher under standardised laboratory conditions compared to bedside-testing of samples (56 % versus 44 %). A positive bedside test was associated with higher viral loads (low Ct value in PCR, high extinction in ELISA, p<0,0057). We observed no correlation between a clinical severity score or number of days between onset of symptoms and bedside testing with correct- positive versus false-negative test results. Serial testing of initially false-negative tested patients (n=4) was not always feasible due to outpatient care, early discharges and transfers between wards. However, serial testing in a single patient showed conversion from false-negative into a correct-positive bedside test result. The RIDA®QUICK NV was developed for human stool samples. In this study, also vomit (n=3) and samples from ileostoma (n=2) were tested with a positive result in vomit. In conclusion, RIDA®QUICK NV is a simple, cost-efficient diagnostic tool, applicable in clinical routine and settings where laboratory methods are not readily available. With respect to its high specificity, this test enables a reliable identification of Norovirus outbreaks. To identify an outbreak, testing 8 to 17 samples (cumulative probability >90%) or one positive result out of 4 tested samples is sufficient. However, in doubtful cases and situations that pose vulnerable patients at risk, negative results should be confirmed by PCR testing. Finally, an improved test sensitivity and more simplified test procedures should be envisaged in future test versions.