Hirudin als in vitro-Antikoagulans in Universalblutentnahmeröhrchen (UBT's)

Abstract

Hirudin, das antikoagulatorische Polypeptid des Blutegel Hirudo medicinalis, verhindert durch seine hoch spezifische, irreversible Wechselwirkung mit Thrombin die Bildung von Blutgerinnseln. Für diagnostische Zwecke könnte Hirudin allen übrigen antikoagulierenden Substanzen überlegen sein, da es andere lösliche Blutbestandteile wie Mineralien und Proteine nur minimal beeinträchtigt. Um diese Hypothese zu überprüfen, wurde hirudiniertes und routinemäßig verarbeitetes Blut aus insgesamt 107 Blutproben von gesunden Freiwilligen und Patienten einer Vielzahl von Bluttests unterzogen, die zum größten Teil automatisiert erfolgten. Bland-Altman-Plots und Korrelationen auf meist sehr hohem Signifikanzniveau zeigten eine sehr gute Übereinstimmung zwischen den Messergebnissen des hirudinierten Blutes und des jeweiligen Standardsubstrates: große automatisch erstellte Blutbilder (K2- EDTA) und die 24 klinisch-chemischen Standardparameter aus Serum. Verschiedene Antikörperbestimmungen (Anti-Hbs-Antikörper, HCV-Antikörper, CMV-Anti¬körper, HIV-Antikörper), Virusnachweise (Hbs-Antigen und HC-Antigen) und Hormonbestimmungen (anhand der Schilddrüsenhormone TSH und TG) konnten mit hirudiniertem Blut zuverlässig durchgeführt werden. Rekombinant hergestelltes Hirudin verändert den Nachweis der Wilms´ Tumor Gen-Expression mittels der RT- PCR Technologie nicht. Ebenso ließen sich Elektrophorese und Immunglobulinnachweise mit hirudiniertem Blut zuverlässig durchführen. Die Ergebnisse der klinisch-chemischen Untersuchungen tiefgefrore¬ner Blutproben zeigten, dass Hirudinplasma auch nach längerer fachgerechter Lagerung zuverlässig untersuchbar bleibt. So zeigten die Untersuchungen die grundsätzliche Möglichkeit mit einem einzigen, mit Hirudin beschichteten universellen Blutentnahmeröhrchen sowohl die automatischen Messungen der hämatologischen und klinisch-chemischen Standardparameter als auch eine Vielzahl von Spezialuntersuchungen durchführen zu können. Damit bilden sie eine solide Grundlage für weiterführende multizentrische Studien zur Validierung dieser Ergebnisse.

Hirudin, the anticoagulatory polypeptide of the leech Hirudo medicinalis, strongly inhibits thrombus formation by specifically interacting with thrombin. For diagnostic purposes, hirudin should be superior to other anticlotting compounds because it only minimally alters the mineral, protein, and cellular blood constituents. To test this hypothesis, hirudinized and routinely processed venous blood from 107 healthy volunteers and patients was subjected to a variety of mostly automated blood tests. Bland-Altman-Plots and a strong correlation showed a very good compliance between the results of the hirudinized blood and the respective standard substrat: automated complete blood counts obtained from K2-ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) anticoagulated and the 24 clinical chemistry parameters obtained from Serum. Different antibody determinations (anti-Hbs-antibody, HCV-antibody, CMV- antibody, HIV-antibody), virus detections (Hbs-antigen and HC-antigen) and hormone determinations (with the thyroid hormones TSH and TG) could be carried out with hirudinized blood well. Recombinant hirudin doesn´t alter the detection of Wilms' tumor gene expression by RT-PCR technology. Also electrophoresis and immunoglobulin detection could be executed with hirudinized blood reliably. The results of the clinical chemical examinations of deep-frozen blood samples showed the basic possibility to examine hirudinized plasma reliably even after lengthy professional storage. So the examinations showed the basic opportunity that a universal hirudin-containing blood sampling tube could be designed for automated analysis of haematological and clinical chemistry analytes as well as for a range of special parameter. Thus they establish a solid basis for multicenter studies to validate these results.