dc.contributor.author
Radev, Yordan Todorov
dc.date.accessioned
2018-06-08T00:47:42Z
dc.date.available
2014-06-10T09:22:33.059Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/12472
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-16670
dc.description.abstract
Einleitung Das maligne Gliom, insbesondere das Glioblastom, stellt durch sein
schnelles Wachstum, aggressive Infiltration von Hirngewebe sowie hoch aktive
Angiogenese eine therapeutische Herausforderung dar. Trotz einiger
Fortschritte in der Therapie wurde keine Verbesserung der schlechten Prognose
dieses Tumors erreicht. Es ist seit Jahrzehnten bekannt, dass der Tumor von
zahlreichen Mikroglia infiltriert wird, die Rolle dieser Zellen dabei bleibt
allerdings unklar. Es gibt Indikationen, dass sie durch Sekretion von
Wachstumsfaktoren und Abbau der Extrazellulärmatrix die Angiogenese
unterstützen könnten. Ein genaueres Verständnis der Beziehung zwischen
Mikroglia und Angiogenese im malignen Gliom könnte zur Verbesserung der
Therapie beitragen. Methoden In der vorliegenden Arbeit wurden bei
C57BL/6-Mäusen GL261-Tumorzellen stereotaktisch in die rechte Hirnhemisphäre
implantiert. Nach Töten der Tiere und Präparation der Gehirne wurden
histologische Gehirnschnitte angefertigt, durch H.E. und Immunfluoreszenz
gefärbt und mittels Licht- und Fluoreszenzmikroskopie analysiert. Ergebnisse
Mikroglia wurden mittels Iba-1-Färbung nachgewiesen. Die Mikrogliadichte in
den experimentell induzierten Gliomen und ihrer Umgebung war signifikant höher
als im gesunden Gewebe. Neben Iba-1 exprimierten alle Mikroglia die marker
CD68 und CD11b. Ein Teil der Mikroglia waren positiv für MHCII, die meisten
waren allerdings negativ für MHCI. Keiner der Marker erlaubte eine
Unterscheidung zwischen ruhenden und aktivierten Mikroglia. Durch
intraperitoneale Applikation von BrdU und dessen Nachweis im Hirngewebe wurde
eine Proliferation der Mikroglia in der Tumorhemisphäre nachgewiesen. Die
Proliferation war in der Tumorhemisphäre am stärksten. Gliomgefäße wurden
durch CD31-Immunfluoreszenz analysiert. Es wurden unregelmäßige großlumige
Gefäße nachgewiesen, die zur Knäuelbildung neigten. Die Gefäßdichte
unterschied sich nicht signifikant zwischen Tumor, dessen Umgebung und der
tumorfreien Hemisphäre. Zahlreiche Gefäße im Tumor und in der Tumorumgebung
waren mit zwei oder mehr Mikroglia kolokalisiert. Schlussfolgerungen Zurzeit
ist es unklar, ob Mikroglia durch Proliferation, Einwanderung von Monozyten
oder beides ihre hohe Zahl im Gliom erreichen. Die Proliferation, die durch
die BrdU-Färbung nachgewiesen wurde, stützt die Hypothese, dass die
Proliferation lokaler Zellen wesentlich zur Erhöhung der Mikrogliaanzahl im
Gliom beiträgt. Die hohe Zahl von Tumorgefäßen, die mit Mikroglia
kolokalisiert sind, unterstützt die Theorie einer möglichen Beziehung zwischen
Mikroglia und Angiogenese im malignen Gliom. Das genaue Expressionsprofil der
Tumormikroglia muss untersucht werden, insbesondere im Hinblick auf
proangiogene Moleküle. Die Möglilchkeit einer Invasion von Monozyten muss mit
anderen Methoden untersucht werden, da diese immunhistochemisch nicht von
vorhandenen Mikroglia unterschieden werden können. Eine Klärung dieser Fragen
würde zu einem besseren Verständnis der Gliompathogenese und möglicherweise
zur Erweiterung der therapeutischen Optionen für diesen Tumor führen.
de
dc.description.abstract
Introduction Malignant glioma, particularly glioblastoma, poses a therapeutic
challenge through its rapid growth, aggressive infiltration of brain tissue
and highly active angiogenesis. Despite some progress in treatment, no
significant improvement in the poor prognosis of this tumor has been achieved.
It has been known for decades that the tumor is infiltrated by numerous
microglia, the role of these immune cells however remains unclear. There are
indications that they could promote tumor angiogenesis through secretion of
growth factors and disruption of extracellular matrix. A more exact
understanding of the link between microglia and angiogenesis in malignant
glioma could contribute to an improvement in therapy. Methods In the current
work, C57BL/6 mice underwent stereotactic intracranial implantation of GL261
tumor cells into the right brain hemisphere. After killing the animals and
processing the brains, histological slices were made, stained by H.E. and
immunofluorescence and analyzed via light and fluorescence microscopy. Results
Microglia cells were detected via Iba-1 staining. The density of microglia in
the experimentally induced gliomas and their vicinity was significantly higher
than in healthy tissue. Besides Iba-1, all microglia expressed CD68 and CD11b.
A part of the microglia were positive for MHC II, however, most microglia were
negative for MHC I. No marker allowed differentiation between resting and
activated microglia. Proliferation of microglia was detected in the tumor
hemisphere through intraperitoneal application of BrdU and BrdU staining in
brain tissue. Proliferation was strongest in the peritumoral area. Glioma
vessels were assessed through CD31 immunofluorescence staining. Irregular
vessels with enlarged lumen and tendency to form tangles were found. Vessel
counts per mm² did not significantly differ between tumor, peritumoral area
and tumor free hemisphere. A considerable number of intratumoral and
peritumoral vessels were colocalized with two or more microglia. Take home
points At present, it is unclear whether microglia reach their high density in
glioma through proliferation, invasion of blood monocytes or both. The
proliferation shown through BrdU staining supports the hypothesis that
proliferation of local cells contributes sizably to the increased number of
microglia in glioma. The high number of tumor vessels colocalized with
microglia supports the theory of a link between microglia and angiogenesis in
glioma. The exact expression profile of tumor microglia needs to be examined,
particularly regarding proangiogenic molecules. A different approach will be
needed to assess the possibility of invasion of monocytes, which cannot be
differentiated immunohistochemically from already present microglia.
Clarification of these questions would lead to an improved understanding of
glioma pathogenesis and possibly to a broader range of therapeutic options for
this tumor.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Charakterisierung der Mikrogliaakkumulation im malignen Gliom
dc.contributor.contact
ytradev@yahoo.com
dc.contributor.firstReferee
N.N.
dc.contributor.furtherReferee
N.N.
dc.date.accepted
2014-06-22
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000096498-9
dc.title.translated
Characterization of microglia accumulation in malignant glioma
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000096498
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000015045
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open access