dc.contributor.author
Conrad, Janine
dc.date.accessioned
2018-06-08T00:47:05Z
dc.date.available
2011-01-20T10:31:19.438Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/12453
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-16651
dc.description.abstract
Zentrale Fragestellung der Arbeit war es, eine mögliche funktionelle
Verknüpfung zwischen dem Onkoprotein Ras und dem Prozess der DNA-Methylierung
in der Suppression bestimmter für die Tumorabwehr wichtiger Gene experimentell
zu unterstützen. Eine Verminderung der MHC-I-Expression wurde bereits im
Zusammenhang mit Ras beschrieben. Weitere wichtige Erkennungs-Moleküle für NK-
Zellen und T-Zellen sind ULBPs, MHC-Klasse-I verwandte Liganden der
Natürlichen Killerzellrezeptoren (NKG2D). Die ULBP-Expression ist bis jetzt
nur wenig verstanden. Gesundes Gewebe exprimiert kaum ULBPs, wohingegen
krankes Gewebe als Stressantwort normalerweise eine deutliche
Oberflächenanreicherung verschiedenster NKG2D-Liganden (MIC-A, MIC-B,
ULBP1/2/3) zeigt. Im Hinblick auf Tumoren findet sich ein heterogenes Bild.
Einige Tumore exprimieren wie vermeintlich gesundes Gewebe gar keine Liganden,
andere sehr viele. Aufgrund der vielseitigen therapeutischen
Ansatzmöglichkeiten, die sich aus der Aufklärung der Regulationsmechanismen
der NKG2D-Liganden ergeben könnten, sind diese ubiquitärer Gegenstand der
aktuellen tumorimmunologischen Forschung. Um einen potentiellen Zusammenhang
zwischen Ras, DNA-Methylierung und Gensuppression zu untersuchen, wurden
Genexpressionsprofile für die humane Kolonkarzinom Zelllinie HCT116 erstellt.
Unter den supprimierten Genen, die nach Inhibition der Ras-Raf-Mek-Erk-Kaskade
wieder aufreguliert wurden, befanden sich HLA-A1/2 und ULBP2 und -3. In der
vorliegenden Arbeit analysierten wir die Methylierungsmuster der Promotoren
dieser Gene mittels Bisulfitsequenzierung in der parentalen HCT116 Zelllinie
und in drei weiteren von Rhee et al. generierten Knockout-Zelllinien: HCT116
DNMT1-/-, DNMT3b-/- und DKO. Der ULBP2-Promotor zeigte eine signifikante
Hypermethylierung, die nach einer Behandlung mit dem Mek/Erk-Inhibitor U0126
nahezu vollständig aufgehoben werden konnte. Weiterhin konnten wir eine
deutliche Hypomethylierung in den drei Knockout-Zelllinien DNMT1-/-, DNMT3b-/-
und DKO zeigen. HLA-A1/2 waren nicht methyliert, jedoch ergaben Vorexperimente
nach Mek/Erk-Inhibierung und Doppelknockout eine vermehrte
Oberflächenexpression für beide Allele. Sowohl ULBP2, als auch HLA-A1/2
scheinen durch ein abgestimmtes Zusammenspiel zwischen onkogenem Ras und DNMTs
direkt bzw. indirekt reguliert zu werden. Unsere Ergebnisse verknüpfen daher
die DNMT-Aktivität mit dem K-Ras induzierten Mek/Erk-Signalweg auf der Ebene
der Zielgene. Die Ras-vermittelte und DNMT-abhängige Suppression der
Immunerkennung könnte zukünftig in der Behandlung von Tumoren mit Inhibitoren
der Mek/Erk-Signalkaskade einen wichtigen Fortschritt in der Immuntherapie
bedeuten.
de
dc.description.abstract
Most malignant features of cancer cells are triggered by activated oncogenes
and the loss of tumor suppressors due to mutation or epigenetic inactivation.
It is still unclear, to what extend the escape of emerging cancer cells from
recognition and elimination by the immune system is determined by similar
mechanisms. Previously transcriptomes of HCT116 colorectal cancer cells
deficient in DNA methyltransferases (DNMTs) and of cells, in which the RAS
pathway as the major growth-promoting signaling system is blocked by
inhibition of MAPK were compared. Interestingly the MHC Class I genes
HLA-A1/A2 and the ULBP2 gene encoding 1 of the 8 known ligands of the
activating NK receptor NKG2D were among a cluster of immune genes up-regulated
under the conditions of both DNMT-deficiency and MEK-inhibition. Bisulphite
sequencing analyses of HCT116 with DNMT deficiency or after MEK-inhibition
showed that de-methylation of the ULPB2 promoter correlated with its enhanced
surface expression. Cosuppression of HLA Class I and NKG2D ligands and genes
encoding peptide transporters or proteasomal genes mediates a strong
functional link between RAS activation, DNMT activity and disruption of the
antigen presenting system controlling immune recognition in colorectal cancer
cells.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
bisulphite sequencing
dc.subject
dna methylation
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Methylierungsanalyse von HLA-A, ULBP2 und ULBP3 in kolorektalen Karzinomzellen
dc.contributor.firstReferee
Priv.-Doz. Dr. rer. nat. Chr. Sers
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. med. T. Tüting, Priv.-Doz. Dr. A. Paschen
dc.date.accepted
2011-02-04
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000019824-1
dc.title.translated
Methylation analysis of HLA-A, ULBP2 and ULBP3 in colorectal cancer cells
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000019824
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000008557
dcterms.accessRights.dnb
free
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open access