dc.contributor.author
Qiu, Runan
dc.date.accessioned
2018-06-08T00:42:43Z
dc.date.available
2014-11-21T13:28:46.018Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/12347
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-16545
dc.description.abstract
Nucleoside analogues are important antiviral agents used to treat infections
with herpes simplex and other viruses. They have the potential to impair male
fertility, however, there is still limited information on this topic. In the
experiments presented here, the effects of four nucleoside analogues were
studied in vitro utilizing the SerW3 cell line, derived from rat Sertoli
cells. Cells were cultured for three days in DMEM supplemented with four
concentrations of the drugs: aciclovir and ganciclovir (0.3 mg/l, 1 mg/l, 3
mg/l, 10 mg/l), and famciclovir and penciclovir (3 mg/l, 10 mg/l, 30 mg/l, 100
mg/l), then later compared with the control group by performing Western Blot
analysis, in which the expression of two junctional proteins (connexin43 and
N-cadherin) and one protein of the cytoskeleton (vimentin) was determined. In
addition, at the end of the culture period, immunofluorescence was performed
using primary antibodies against connexin43, N-cadherin and vimentin, and a
FITC-labeled secondary antibody. In the Western Blot analysis, aciclovir was
found to cause a significant effect at the highest concentration tested (10
mg/l), which is less than the peak concentration measured in patients after
intravenous infusion of the drug. The content of connexin43, vimentin and
N-cadherin decreased to 49.8 ± 17.2 %, 68.3 ± 7.6 % and 75.3 ± 1.7 % of the
control values, respectively (n=3; mean ± SD). Similar effects were observed
with ganciclovir (43.2 ± 10.8 %; 76.9 ± 4.5 %; 84.4 ± 10.8 % of the control
values). Penciclovir caused less pronounced effects at 10.0 mg/l medium (82.1
± 20.6 %; 83.0 ± 17.9 %; 76.5 ± 17.7 % of controls). Only a slight effect was
observed with the prodrug famciclovir; even at a 10-fold concentration (100
mg/l), only moderate changes were induced. A change in protein content to
values of 83.5 ± 1.7 %, 91.2 ± 3.3 %, and 85.3 ± 5.1 %, respectively, was
observed for the three proteins when the cells were exposed to famciclovir.
Using the immunofluorescence technique, the fluorescence intensity of
connexin43, N-cadherin and vimentin was observed to decrease after three days
of culture with aciclovir, ganciclovir and penciclovir when compared to the
control group, but no aberrant localization was detected. In these
experiments, compared to N-cadherin and vimentin, connexin43 was found to be
the best marker for detecting negative effects on these cells. In summary,
aciclovir and ganciclovir showed stronger effects on the SerW3 cells compared
to famciclovir and penciclovir.
de
dc.description.abstract
Nukleosid-Analoga sind wichtige antiviral wirksame Arzneimittel, die zur
Behandlung von Herpes simplex-Infektionen und anderen Viruserkrankungen
eingesetzt werden. Es gibt tierexperimentelle Hinweise, dass sie die männliche
Fertilität schädigen können. Die bisher publizierten Daten sind jedoch sehr
lückenhaft, insbesondere fehlen direkt vergleichende Untersuchungen. Die hier
beschriebenen Experimente sollen einen Beitrag dazu leisten, die Situation zu
verbessern. Im Rahmen dieser Arbeit wurden die Wirkungen von vier Nukleosid-
Analoga auf SerW3-Zellen untersucht. Die SerW3-Zelllinie wurde aus Sertoli-
Zellen von Ratten abgeleitet. Die Zellen wurden für drei Tage in einem DMEM
Kulturmedium mit vier verschiedenen Konzentrationen von Aciclovir und
Ganciclovir (0,3 mg/l, 1 mg/l, 3 mg/l, 10 mg/l), sowie Famciclovir und
Penciclovir (3 mg/l, 10 mg/l, 30 mg/l, 100 mg/l) behandelt. Anschließend
wurden zwei Transmembranproteine (Connexin-43 und N-Cadherin) und ein Desmin
(Vimentin) per Western Blot analysiert; die Ergebnisse wurden mit denen von
Kontrollzellen verglichen. Zusätzlich wurden die Zellen am Ende der Kultur mit
Antikörpern gegen Connexin-43, N-Cadherin und Vimentin unter Verwendung eines
FITC-markierten sekundären Antikörpers markiert und mit Hilfe der
Fluoreszenzmikroskopie untersucht. In der Western Blot-Analyse zeigte sich,
dass Aciclovir in der höchsten untersuchten Konzentration (10 mg/l) einen
signifikanten Effekt auf die genannten Proteine hat. Diese Konzentration von
10 mg/l ist geringer, als die mittlere maximale Plasmakonzentration, die bei
Patienten nach intravenöser Gabe von Aciclovir gemessen wird. Die Gehalte von
Connexin-43, Vimentin and N-Cadherin sinken auf Werte von 49,8 ± 17,2 %, 68,3
± 7,6 % und 75,3 ± 1,7 % im Vergleich zur Kontrollgruppe (n=3; Mittelwert ±
SD). Ein entsprechender Effekt konnte auch mit Ganciclovir beobachtet werden
(43,2 ± 10,8 %; 76,9 ± 4,5 %; 84,4 ± 10,8 % im Vergleich zur Kontrollgruppe).
Penciclovir zeigte einen geringeren Effekt bei 10,0 mg/l (82,1 ± 20,6 %; 83,0
± 17,9 %; 76,5 ± 17,7 % im Vergleich zur Kontrollgruppe). Noch weniger
ausgeprägt waren die Veränderungen nach Behandlung der Zellen mit dem Prodrug
Famciclovir: nach Exposition mit der 10-fach höheren Konzentration (100 mg/l)
konnte für die drei Proteine eine Reduktion des Proteininhaltes auf 83,5 ± 1,7
%, 91,2 ± 3,3 % und 85,3 ± 5,1 % der Kontrollwerte festgestellt werden. In der
Fluoreszenz-Mikroskopie wurde bei Benutzung der Antikörper gegen Connexin-43,
N-Cadherin und Vimentin in der genannten Reihenfolge eine zunehmende
Fluoreszenz beobachtet. Nach Tagen der Kultivierung mit Aciclovir, Ganciclovir
und Penciclovir war beim Vergleich mit der Kontrollgruppe tendenziell eine
Abnahme der Fluoreszenz aber keine aberrante zelluläre Lokalisation der
Proteine zu erkennen. Im Vergleich der analysierten Proteine stellte heraus,
dass Connexin-43 der beste Marker war, um zelluläre Veränderungen durch die
untersuchten Arzneistoffe zu beschreiben. Zusammenfassend kann gesagt werden,
dass Aciclovir und Ganciclovir einen deutlicheren Effekt als Famciclovir und
Penciclovir auf die SerW3 Zellen zeigten.
de
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
nucleoside analogues
dc.subject
protein expression
dc.subject
SerW3 cell line
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Effects of nucleoside analogues on protein expression in cells of the SerW3
cell line
dc.contributor.contact
runan.qiu@charite.de
dc.contributor.firstReferee
N.N.
dc.contributor.furtherReferee
N.N.
dc.date.accepted
2014-12-05
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000097642-2
dc.title.translated
Effekte von Nukleosid-Analoga auf die Proteinexpression von SerW3 Zellen
de
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000097642
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000015880
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access