dc.contributor.author
Rykl, Jana
dc.date.accessioned
2018-06-08T00:09:42Z
dc.date.available
2006-08-28T00:00:00.649Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/11555
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-15753
dc.description
Titelblatt und Inhaltsverzeichnis
Introduction
Methods
Results
Discussion
Summary
Literature
List of figures and tables
List of abbreviations
Acknowledgement
Erklärung
dc.description.abstract
The object of this work was the purification, characterization and
identification of angiotensin-II-generating enzymes from porcine renal tissue.
Three different angiotensin-II-generating enzymes were purified using protein
liquid chromatography techniques. During the course of purification
angiotensin-II-generating enzyme activity was measured and characterized using
a novel mass spectrometry based assay system (MES-assay system) for the
detection of proteolytic enzyme activities. One active fraction, here named
Fraction I was purified using a combination of anion exchange, hydroxyapatite,
lectin affinity and chymostatin-antipain-inhibitor affinity chromatography.
Protein identification experiments using peptide mass fingerprint identified
this enzyme as Cathepsin G. Cathepsin G was detected in kidney for the first
time. The second active fraction, here named Fraction II was purified using a
combination of anion exchange, hydroxyapatite, and lentil lectin sugar
affinity and size exclusion chromatography. Protein identification experiments
identified this enzyme as Angiotensin converting enzyme. The successful
purification of ACE is a proof of principle for the chosen purification
strategy and the novel MES-assay system. The third angiotensin-II-generating
enzyme fraction, here named Fraction III was purified using a combination of
anion exchange, wheat germ lectin sugar affinity and aprotinin-inhibitor
affinity chromatography. The identification of this enzyme did not succeed.
Experiments in order to characterize this enzyme fraction were carried out.
The molecular weight of the enzyme fraction was approximately 160 kDa. A
unique feature of Fraction III was its substrate specifity. Besides its
angiotensin-II-generating activity it cleaved the L-kininogen analogue Lys-
Bradykinin-Ser-Val-Gln-Val-Ser to form Des-Arg10-Kallidin. The proteolytic
activity of Fraction III does not coincide with the known proteases of the
Kinintensin system. Further research efforts should be made to reveal the
identity of this enzyme.
de
dc.description.abstract
Das Thema dieser Arbeit war die Reinigung, Charakterisierung und
Identifizierung von Angiotensin- II generierenden Enzymen aus der
Schweineniere. Drei verschiedene Angiotensin- II generierende Enzyme wurden
mit Hilfe der Flüssigchromatographie aufgereinigt. Die Angiotensin-II
generierende Enzymaktiviät wurde während der Aufreinigung mittels eines neuen
Massenspekrometrie basierten Nachweissystems (MES-System) detektiert und
charakterisiert. Eine aktive Fraktion, hier Fraktion I genannt, wurde mit
einer Kombination von Anionenaustausch-, Hydroxyapatit-, Lectin- und
Chymostatin-Antipain-Affinitätschromatographie gereinigt. Mit Hilfe von
Proteinidentifizierungsexperimenten wurde das Angiotensin-II generierende
Enzym dieser Fraktion als Cathepsin G identifiziert. Cathepsin G wurde das
erste Mal in der Niere nachgewiesen. Eine zweite aktive Fraktion, hier
Fraktion II genannt, wurde mit einer Kombination von Anionenaustausch-,
Hydroxyapatit-, Lectin- und Größenausschlusschromatographie gereinigt. Mit
Hilfe von Proteinidenfizierungsexperimenten wurde das Angiotensin-II
generierende Enzym dieser Fraktion als Angiotensin Converting Enzym
identifiziert. Die erfolgreiche Aufreinigung ein Beweis für das Funktionieren
der gewählten Aufreinigungsstrategie und des neuartigen MES- Nachweissystems.
Eine dritte aktive Fraktion, hier Fraktion III genannt, wurde mittel einer
Kombination aus Anionenaustausch-, Lectin- und Aprotinin-
Affinitätschromatographie aufgereinigt. Die Identifizierung des Angiotensin-II
generierenden Enzyms dieser Fraktion gelang nicht. Experimente zur
Charakterisierung dieser Enzymfraktion wurden durchgeführt. Das
Molekulargewicht betrug ca. 160 kDa. Ein besonderes Merkmal dieser
Enzymfraktion war die Subtratspezifität. Neben der Angiotensin-II generierende
Aktivität spaltete es das L-Kininogen Analogon Lys-Bradikin-Ser-Val-Gln-Ser
Substrat proteolytisch zu Des-Arg10-Kallidin. Weitere Anstrengungen müssen
unternommen werden, um die Identität dieses Enzyms zu klären.
de
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
Angiotensin-II
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Purification and characterization of angiotensin-II-generating enzymes from
porcine renal tissue
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. Hartmut Schlueter
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. Thomas Unger
dc.date.accepted
2006-09-05
dc.date.embargoEnd
2006-09-12
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000002320-2
dc.title.translated
Aufreinigung und Charakterisierung von Angiotensin-II-generierenden Enzymen
aus dem Schweinenierengewebe
de
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000002320
refubium.mycore.transfer
http://www.diss.fu-berlin.de/2006/464/
refubium.mycore.derivateId
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dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access